臧学丽

（长春医学高等专科学校，吉林长春 130031）

纳豆激酶生产菌的亚硝基胍诱变

臧学丽

（长春医学高等专科学校，吉林长春 130031）

文章研究了产纳豆激酶枯草芽孢杆菌的亚硝基胍诱变。采用亚硝基胍为诱变剂诱变枯草芽孢杆菌，诱变后酶活达到4 100U/g，提高了122.2%，为进一步的发酵研究提供依据。

纳豆激酶 亚硝基胍 枯草芽孢杆菌

纳豆激酶（Nattokinase，NK）是由枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis natto，BSN）产生的一种碱性蛋白酶，它具有溶解血栓的作用[1]。纳豆激酶具有安全、副作用少、成本低、易吸收[2]、在体内作用时间长等优点[3]，是一种具有开发潜力的溶栓药物。文章对产纳豆激酶的枯草芽孢杆菌进行了化学诱变[4]，使纳豆激酶的活性得到显著提高。

1 材料与方法

1.1 材料

试验菌株：纳豆枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis natto，BSN），长春医学高等专科学校生工试验室保藏。筛选培养基：纤维蛋白平板复筛培养基。

1.2 方法

1.2.1 生长曲线的测定

在37℃条件下以8%的接种量接种纳豆枯草芽孢杆菌于液体培养基中，在培养0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h、28 h、32 h、36 h、40 h、44 h、48 h后于600 nm波长的紫外可见分光光度计下测其OD值，3组平行并绘制生长曲线。

1.2.2 纳豆激酶活性测定

（1）纤维蛋白平板法：参照Astrup法[5]。

（2）纳豆中纳豆激酶活力测定。称取黄豆500 g，洗净加入2.5倍水，浸泡过夜，分装到250 ml三角瓶中，121℃高压灭菌0.5 h，自然冷却至50℃时以8%的接种量接上种子液，在37℃条件培养25 h。称取纳豆50 g，加入100 ml生理盐水，浸泡30 min，5 000 r/min离心10 min，取上清液稀释一定的倍数，采用纤维蛋白平板法测定酶活。

1.2.3 枯草芽孢杆菌的诱变育种

培养纳豆枯草芽孢杆菌至菌株的对数期，4℃冷冻高速离心机中5 000 r/min离心5 min。……