槐耳颗粒治疗乳腺癌的研究进展

2016-02-01毛思颖曹海明陈前军广州中医药大学广东广州50405广东省中医院大学城医院广东广州50006

中成药 2016年6期

关键词：乳腺癌颗粒化疗

毛思颖，曹海明，陈前军（.广州中医药大学，广东广州50405；2.广东省中医院大学城医院，广东广州50006）

槐耳颗粒治疗乳腺癌的研究进展

毛思颖1，曹海明1，陈前军2*
（1.广州中医药大学，广东广州510405；2.广东省中医院大学城医院，广东广州510006）

本文综述了槐耳颗粒近年来在乳腺癌方向的基础及临床研究进展。槐耳颗粒可通过抑制增殖、诱导凋亡、逆转耐药、抗新生血管生成等机制，发挥对乳腺癌的治疗作用。临床研究提示槐耳颗粒存在着降低乳腺癌患者复发转移率，延长无病生存期，免疫功能调节的作用。

槐耳颗粒；乳腺癌；研究进展

槐耳是一种药用真菌，味苦辛，性平无毒，具有扶正固本、活血消癓作用，在祖国医学中已有约1 600年的使用历史。槐耳菌质经热水、乙醇等提取可得槐耳清膏（相对密度1.33以上），加入适量糊精、糖粉等辅料，混合均匀、烘干后制成颗粒，即槐耳冲剂（颗粒剂）。卫生部于1992年批准槐耳菌质与槐耳冲剂（颗粒剂）为中药一类新药，由启东盖天力药业有限公司独家生产，包装成每袋20 g，称金克槐耳颗粒剂。现代药理研究得出槐耳主要活性成分为多糖蛋白（PS-T）［1］。近年来，槐耳颗粒的抗癌作用引起了人们的广泛关注，越来越多的基础及临床证据表明，槐耳颗粒是一种有前景的抗癌药物，也逐渐应用到临床多种肿瘤的治疗中［2-5］。槐耳颗粒在乳腺癌中的应用价值也受到了关注［6］，现将其治疗乳腺癌的研究进展综述如下。

1　基础研究

多项体内及体外研究均表明槐耳对乳腺癌具有潜在的治疗价值，同时伴有极少的毒副作用。体外实验中多直接

采用槐耳清膏或槐耳颗粒，一般是将槐耳清膏（颗粒）加入磷酸盐缓冲液（或灭菌注射用水）中充分搅拌震荡至完全溶解，用滤过膜过滤配制成贮备液，4℃冰箱保存备用，实验时再配制成所需质量浓度。槐耳的抗癌机制可能与多种生物活动相关，如抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制肿瘤干细胞、干扰肿瘤新生血管生成等，这些研究结果共同为槐耳在乳腺癌中的实际应用奠定坚实基础，现归类总结如下。

1.1抑制细胞增殖体外实验中，李霜［7］发现4、8、16 mg/m L质量浓度下的槐耳清膏分别处理人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞24 h后，能呈剂量依赖性地抑制肿瘤细胞增殖，同时4.0 mg/mL的槐耳清膏能降低上述细胞系的侧群细胞比例。季春宜［8］发现不同质量浓度的槐耳颗粒（1、2、4、8 mg/mL）分别处理MCF-7和MDA-MB-231不同时相细胞后，对乳腺癌细胞均可产生生长抑制作用，并且随着药物质量浓度和作用时间的增加，抑制作用逐渐增强，呈时间-剂量效应关系。在乳腺癌裸鼠移植瘤模型中，也发现槐耳颗粒可抑制MCF-7移植瘤的生长［9］。关于槐耳颗粒抑制细胞增殖的机制也得到了探讨，通过流式细胞技术，Zhang等［10］在经槐耳颗粒处理的MCF-7、MDA-MB-231细胞中均检测出G0、G1细胞周期的停滞，同时发现抑癌基因p53表达的增强，抑癌基因p53早被证实参与调控细胞周期的进程、DNA损伤修复、维持基因组稳定性等活动，从而提示槐耳颗粒可能会通过p53基因诱导的细胞周期停滞来实现对细胞增殖的抑制作用。最近Wang等［11］研究提示，在经槐耳颗粒处理的3种雌激素受体α（ERα）阳性乳腺癌细胞系（MCF-7、T47D、ZR-75-1）中均发现ERα的mRNA及蛋白水平下调，提示槐耳颗粒可能通过削弱雌激素的刺激作用从而抑制细胞的增殖。

1.2诱导肿瘤细胞凋亡细胞凋亡是基因编码的程序性细胞自杀行为，它对维持机体的正常生长发育起着重要的作用，同时也作为限制肿瘤发展的天然壁垒。因此，诱导肿瘤细胞凋亡被认为是肿瘤预防和治疗的又一重要策略。在乳腺癌裸鼠移植瘤模型中，袁鹏等［9］发现槐耳颗粒可促进移植瘤细胞的凋亡。已有研究结果提示槐耳颗粒对体外培养的人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞均有诱导凋亡的作用［7-8］，经槐耳处理的MCF-7细胞大部分出现了细胞增大，形态欠规则，细胞质空泡化等改变［10］。徐亮［12］等报道10 mg/mL槐耳清膏在体外对MCF-7和MDA-MB-231细胞具有明显的诱导凋亡作用，其机制可能与凋亡相关基因Caspase-3表达上调相关。此外，王莉莉［13］研究发现槐耳清膏与化疗药物紫杉醇、洛铂联合应用时，对诱导MCF-7细胞的凋亡具有协同作用，其机制分别与细胞周期G2/M、G0/G1期阻滞相关。

1.3抑制肿瘤干细胞肿瘤干细胞是一组具有自我更新及分化能力的肿瘤始祖细胞，目前研究认为其与肿瘤的生长、复发相关，且能抵抗传统的肿瘤治疗，如放化疗。因此，肿瘤干细胞成为肿瘤治疗的又一重要靶点。胡保全等［14］发现质量浓度为1、10 mg/mL的槐耳清膏对人乳腺癌细胞系SUM-159的细胞克隆形成能力和成球能力具有明显的抑制作用，同时能够降低SUM-159细胞中ALDH1high（aceta1dehyde dehydrogenase，人乙醛脱氢酶）细胞比例，提示槐耳清膏可能对乳腺癌干细胞具有一定的抑制或杀伤作用。Wang等［15］研究发现槐耳清膏对肿瘤干细胞的抑制作用机制部分依赖Hh（hedgehog）信号通路的失活，而Hh信号通路被认为与正常的乳腺发育及乳腺癌进展相关［16］。

1.4逆转耐药作用李戎等［17］研究发现非细胞毒性剂量（0.01mg/mL）的槐耳清膏能显著降低化疗单药ADM（阿霉素）对MCF-7/A的IC50（半数抑制浓度），其逆转倍数为5.1倍，且其逆转机制和耐药基因MDR-1的mRNA以及相应的P-gp（P-糖蛋白）、MRP蛋白（多药耐药相关蛋白）的表达水平下降相关。张玉宝等［18］也发现0.01 mg/mL的槐耳颗粒能显著降低ADM对MCF-7/A的IC50，逆转倍数为4.5倍，耐药倍数为 21.7倍，其机制可能与耐药基因MDR-1表达下调相关。此外，薛丹青等［19］研究提示槐耳清膏具有体外逆转MCF-7/R细胞对三苯氧胺（TAM）的耐药作用，逆转机制可能与下调ERK1/2（细胞外信号调节激酶）的表达水平相关，提示槐耳清膏可能是一种有潜力的耐药逆转剂。

1.5抑制肿瘤细胞迁移转移作为导致肿瘤治疗失败及最终死亡的主要原因之一，是一个极其复杂的多步骤过程。Kong等［20］通过微阵列分析，提示槐耳颗粒存在着影响MDA-MB-231细胞迁移的能力。在细胞迁移实验中，与未经处理的细胞相比，经4 mg/mL槐耳清膏处理的MDA-MB-231及MCF-7细胞的迁移活动均出现明显抑制［10］，提示槐耳对肿瘤细胞的迁移具有一定的抑制作用。

1.6抑制新生血管的生成肿瘤血管生成是由血管内皮细胞、肿瘤细胞与其微环境相互影响的结果，是肿瘤生长、侵袭、转移的一个重要因素。许戈良等［21］发现经（0.1、1、10 mg/m L）槐耳清膏处理后，HUVECs（人脐静脉内皮细胞）增殖和分化成血管的能力均受到抑制，其机制可能与槐耳清膏阻止内皮细胞由S期进入G2/M期有关。Wang等［22］也发现质量浓度为（4、8、16 mg/mL）槐耳颗粒能抑制HUVECs的增殖，并呈时间-剂量依赖性，其可能的机制与p21蛋白介导的细胞周期阻滞相关。同时，槐耳颗粒能以浓度依赖型方式抑制ERK的活性，从而作用到VEGF（血管内皮生长因子）的表达。赵晴晴［23］研究发现槐耳清膏联合环磷酰胺节拍化疗可以通过上调TSP-1（血小板反应蛋白-1）的表达，下调VEGF的表达发挥抗肿瘤血管生成的作用，从而对MCF-7乳腺癌起到抗肿瘤效应。

此外，Wang等［24］研究发现槐耳清膏能诱导人乳腺癌MDA-MB-231、MDA-MB-468及MCF-7肿瘤细胞发生自噬性死亡，其机制可能与mTOR/S6K通路的抑制相关。王晓庆［25］等发现在槐耳清膏作用下，乳腺癌患者外周血单核细胞分泌的细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）较对照组增加，而IL-4和IL-10减少，提示辅助性T细胞亚群Th1相对处于优势状态，Th2型反应模式处于弱势状态，Th1/Th2平衡向Th1方向漂移，从而调整抗肿瘤的免疫能力。

虽然上述关于槐耳制剂的研究结果大多是令人欣喜的，但目前仍存在一定的局限性。大多数的研究均使用槐耳水提取物，因此观察到的生物学效应有可能会受到不同成分的综合影响，故槐耳中具体的抗癌有效成分仍有待进一步研究［26］。此外，目前尚缺乏关于槐耳吸收、分布、代谢等相关的试验、文献研究资料等。因此，仍有待进一步的基础研究去探索槐耳在肿瘤防治方面的应用价值。

2　临床研究

2.1槐耳颗粒在晚期乳腺癌等患者中的应用探讨不少学者早已开始探讨槐耳颗粒在乳腺癌患者中的临床应用价值。钟少文［27］等观察了29例单纯使用槐耳颗粒的Ⅳ期乳腺癌患者，发现与33例CTF（环磷酰胺+吡喃阿霉素+5-氟尿嘧啶）方案化疗患者相比，槐耳组患者的生存质量明显提高（P＜0.05），部分患者的生存时间延长。同样，吴英宝等［28］观察了52例Ⅳ期乳腺癌患者，其中24例患者纳入治疗组（仅用槐耳颗粒），与CTF方案化疗组相比，治疗组患者证候得到好转（P＜0.05），生存时间及生存质量均得到改善（P＜0.01）。刘艳辉等［29］观察了46例Ⅳ期乳腺癌伴高血压的患者，发现治疗组（仅服槐耳颗粒）的生存质量得到改善，且患者神疲乏力、消瘦、疼痛、舌质瘀暗等中医证候指标评分均优于CTF方案化疗组。除了晚期乳腺癌患者，槐耳颗粒在术前化疗患者中的应用也得到了关注。陈前军等［30］将38例术前乳腺癌患者随机分为治疗组（槐耳颗粒联合CTF方案化疗）及对照组（化疗组），发现治疗组的总缓解率为90%，较对照组（68.8%）疗效更优（P＜0.05），同时治疗组较少出现骨髓抑制（P＜0.05）。陆烨等［31］观察了槐耳颗粒对乳腺癌正虚血瘀证患者的有效性，发现治疗组（加服槐耳颗粒）在临床症状、免疫指标、体力状况、化疗毒副反应等方面均优于化疗组。除了化疗，木妮热·木沙江等［32］尝试将槐耳颗粒应用于乳腺癌放疗中，对89例乳腺癌术后有放疗指征患者分别行单纯放疗（对照组）、放疗联合槐耳颗粒（治疗组），在放疗5周时评估患者一般状态评价，发现治疗组发生全身乏力、面色苍白、纳差、恶心等症状明显少于对照组（P＜0.05），而出现外周血象、肝功变化、皮肤等不良反应亦少于对照组，但差别无统计学意义（P＞0.05）。以上研究结果提示槐耳颗粒可改善患者生活质量，延长部分患者的生存期，同时有可能提高化疗疗效。

2.2槐耳颗粒预防乳腺癌复发转移的运用探讨复发转移是乳腺癌治疗失败的主要原因，因此针对已完成术后常规治疗的患者，槐耳颗粒是否能在复发转移方面发挥优势也得到了关注。司徒红林、孙俊超［33-34］等探讨了槐耳颗粒对乳腺癌术后高危复发患者近期复发转移的影响，发现104例治疗组（加服槐耳颗粒）患者3年无病生存期较100例对照组长（P＜0.05）；治疗组复发转移率低于对照组（P＜0.05），但两组患者3年的总生存率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。关若丹等［35］对165例可手术乳腺癌巩固期患者进行了回顾性队列研究，结果提示接受槐耳颗粒干预的观察组和对照组患者的复发转移率分别为0.03%和0.10%，观察组较对照组降低，但差异无统计学意义（P＞0.05）；观察组无复发生存时间为（21.34±9.17）月，对照组为（18.36±9.54）月，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05），但两组的总生存时间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。田平等［36］观察了80例乳腺癌术后患者，发现治疗组（加服槐耳颗粒）与单纯化疗组相比，复发率及远处转移率均出现下降（P＜0.05）。同时，三阴性乳腺癌、老年乳腺癌患者也得到了关注，张建国等［37］收集了64例三阴性乳腺癌术后辅助治疗的患者，发现治疗组（加服槐耳颗粒）的3年生存率高于对照组（P＜0.05），治疗组的局部复发率和远处转移率也低于对照组（P＜0.05）。也有学者探讨了槐耳颗粒在老年乳腺患者中的使用价值，发现针对老年乳腺癌患者，槐耳颗粒亦有降低复发转移率，延长无病生存时间，提高患者生存质量的优势［38-40］。

2.3槐耳颗粒调节乳腺癌患者免疫功能的应用探讨有报道指出槐耳颗粒存在免疫功能调节作用，徐峰等［41］观察了槐耳颗粒对行TAC（多西他赛+阿霉素+环磷酰胺）方案新辅助化疗乳腺癌患者细胞免疫功能的影响，发现化疗后治疗组（加服槐耳颗粒）的免疫指标 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和自然杀伤（NK）细胞水平明显高于单纯化疗组（P＜0.05）。代佑果等［42］收集了68例Ⅱa～Ⅲa期行化疗的乳腺癌患者，也发现化疗后治疗组（加服槐耳颗粒）的免疫指标CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞水平明显高于对照组（P＜0.05）。唐云等［43］研究了25例乳腺癌术后辅以槐耳颗粒干预的患者（治疗组），发现其淋巴细胞计数和体液免疫功能指标免疫球蛋白IgA、IgG、IgM水平均比对照组高（P＜0.05），提示经槐耳颗粒治疗后患者的体液免疫功能恢复较快；同时，治疗组的CD3、CD4+/ CD8+水平也高于对照组，提示治疗组细胞免疫功能也可能恢复较快。

目前关于槐耳颗粒抗肿瘤价值的临床研究尚不充足，尤其缺乏高质量的随机对照研究。现有的研究大多为非随机对照的研究，主要存在以下问题：①样本量普遍不足，缺乏多中心对照数据；②槐耳使用疗程目前尚未统一，难以合并不同研究的数据；③随访时间不统一，难以避免漏诊现象；④终点指标尚未统一，目前大多集中在复发转移率、无进展生存期、总生存期等方面；⑤部分患者同时服用中药、中成药等扶正类药物，研究中未能体现控制或量化，易干扰结果。因此，仍有待更多高质量的临床研究去探讨槐耳颗粒的抗肿瘤价值。

乳腺癌已成为了中国女性最常见的癌症，在癌症死亡相关原因中位居第六。自90年代以来，中国乳腺癌发病的年均增长速度约为全球的两倍，城市地区尤为显著［44］。因此，乳腺癌所致的健康负担逐年增长，由于传统抗肿瘤西药的毒副作用大，因此从传统中医药中筛选有效、低毒的相关药物已成为目前的研究热点，而源自于真菌的槐耳具有疗效佳、安全性好、价格低等［45］特点。虽然目前槐耳颗粒抗乳腺癌的作用机制仍有待进一步阐明，但临床观察已发现槐耳颗粒存在着降低乳腺癌患者复发转移率，延长无病生存期，免疫功能调节等作用，相信槐耳颗粒在抗乳腺癌方面具有广阔的应用前景。

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