闫振宇

(南阳市中心医院病理科,河南　南阳　473009)



前列腺干细胞抗原在前列腺上皮内瘤发生继发性癌变中的预测意义

闫振宇

(南阳市中心医院病理科,河南南阳473009)

摘要〔〕目的探讨前列腺干细胞抗原(PSCA)与前列腺上皮内瘤(PIN)发生继发性癌变的相关性。方法115例孤立性PIN患者根据病理分级分为低级别PIN(LGPIN)和高级别PIN(HGPIN)两组，采用核酸原位杂交法检测PSCA mRNA的表达，采用Logistic单因素、多因素回归分析PSCA与PIN继发性癌变的关系。结果PSCA mRNA在HGPIN组织中的阳性表达率显著高于LGPIN组织(P<0.01)；孤立性LGPIN、HGPIN，未继发前列腺癌患者PSCA mRNA阳性率均显著低于继发前列腺癌患者(P<0.01)；单因素和多因素的Logistic回归分析结果提示对于孤立性的LGPIN和HGPIN，最初的活检PSCA mRNA的水平均能对继发癌症的出现有预测价值(P<0.01)。结论PSCA在PIN进展为前列腺癌的过程中有着非常重要的预测价值。

关键词〔〕前列腺干细胞抗原；前列腺上皮内瘤；前列腺癌

第一作者：闫振宇(1971-)，男，主治医师，主要从事临床病理诊断研究。

前列腺上皮内瘤(PIN)是现在采用的前列腺导管和腺泡病变的名称，也被描述为导管内或导管-腺泡的非典型增生，病理学可分为3级，其中2、3级属于高级别的PIN(HGPIN)，相关研究已证实其是组织结构中最可能进展成为前列腺癌的一种癌前病变〔1〕；而1级则为低级别的PIN(LGPIN)，其进展为癌的风险相对HGPIN显著降低。前列腺干细胞抗原(PSCA)是糖蛋白，具有123个氨基酸，属于前列腺特异性的优势表达的一个细胞表面标记，将近82%的HGPIN样本中PSCA mRNA呈强阳性〔2〕。本研究旨在探讨PIN中PSCA mRNA表达水平与前列腺癌的发生和发展的关系。

1资料与方法

1.1一般资料2005年1月至2010年1月我院孤立性PIN患者115例，均得到了直肠超声引导的前列腺活检的确诊，活检平均使用9(6-12)点法，活检开始时，均未出现共存癌且未曾被诊断为前列腺癌、未接受过去势治疗。排除经重复活检、开放手术或尿道切除取得组织后被确诊为癌的患者。其中LGPIN 50例，HGPIN 65例，由LGPIN继发为癌的8例，由HGPIN继发为癌的25例，共33例。LGPIN组年龄32～68岁，HGPIN组年龄35～70岁。随访60～77(平均67.4)个月。随访过程中，所有患者在活检最初诊断为PIN≤18个月中，接受前列腺活检的初次12点随访。对活检均使用标准法，在外周区域采用两个不间断的六分仪的活组织仪自左向右采集。首次随访中依然为PIN的患者，1年后采用相同的方法施行前列腺活检的第2次12点随访，且将此作为研究终点〔3〕。初次诊断性活检之前，先通过放射免疫法对血清前列腺特异抗原(PSA)进行测量，然后实施直肠指诊(DRE)。收集并完全包埋所有通过穿刺活检所收集的样本。选取能对病变诊断有清晰显示的最大组织块，用4%的多聚甲醛(pH=7.4的0.1% DEPC和0.1 mol/L的PBS)及时进行处理，最后包埋于石蜡内。将石蜡切块以5 μm的厚度切片，包埋于覆盖着聚乙烯的载玻片内。

1.2研究方法对PSCA mRNA施行原位杂交法标记。脱蜡、脱水、消化为组织块(厚5 μm)，采用人PSCA反义探针(异羟基洋地黄毒苷标记)，于48℃下进行杂交、过夜。洗涤，采用生物素化的鼠抗异羟基洋地黄毒苷抗体于37.5℃下进行1 h的孵育，然后在相同温度环境中使用链霉亲和素过氧化酶同样进行20 min的孵育。接着将3,3-二氨基联苯(DAB)滴入，呈棕黄色。苏木素复染。于载玻片上，用感觉探针杂交或PBS在无RNA酶环境中进行整个过程，作阴性对照。每个玻片均在Olympus BX-53的光学显微镜下进行阅读。按200倍放大后，随机抽取10个视野进行观察，均匀染成褐色细胞质的细胞作PSCA mRNA阳性表达。

1.3统计学方法采用SPSS19.0软件进行t检验和Logistic回归分析。

2结果

2.1PSCA mRNA的表达情况PSCA mRNA在LGPIN组织表达普遍为阴性，阳性表达率约18.0%(9/50)，平均阳性细胞比例为(9.3±1.8)%；而在HGPIN组织阳性表达率为80.0%(52/65)，平均阳性细胞比例为(30.3±1.9)%，提示PSCA mRNA在HGPIN组织中的阳性表达率高于LGPIN组织(P<0.01)。

2.2继发前列腺癌组织内PSCA mRNA的表达继发前列腺癌的肿瘤细胞内PSCA mRNA呈阳性表达，细胞平均阳性率〔(70.4%±9.8)%(30%～90%)〕明显高于最初活检是PIN的患者〔(26.7±4.5)%〕(P<0.05)。针对孤立性LGPIN、HGPIN，未出现前列腺癌细胞的阳性率〔(15.2±2.7)%，(5.1%±0.8)%〕与出现继发前列腺癌〔(47.5±6.4)%，(24.3±3.3)%〕均具有显著差异(P<0.01)。

2.3单、多变量Logistic回归分析对孤立性LGPIN患者应用单、多变量Logistic回归分析预测其发生癌症可能性的结果显示，只有最初的活检PSCA mRNA的水平(4.27±0.56)能对继发癌症的危险进行预测(P<0.01)，而12点(1.13±0.64)、6点活检(1.51±0.47)的改变和DRE(1.25±0.64)、血清PSA值(1.57±0.54)、最初活检期间发现的孤立性LGPIN(0.92±1.04)均无法将继发癌症的危险进行显著预测(P>0.05)。单变量回归分析孤立性HGPIN患者的结果显示，最初活检期间HGPIN的存在(1.27±0.03)、12点活检(1.27±0.03)及活检组织中PSCA mRNA的水平(1.09±0.52)均能对随访期间发生的继发癌进行有效预测(P<0.05)，但是最初活检和12点活检期间存在的孤立性HGPIN不再是预测癌症发生的指标(P>0.05)。在孤立性LGPIN中也适用同样的结果，最初6点活检、DRE结果、血清PSA值的变化均无法对癌症的发生进行有效预测(P>0.05)。见表1。

表1　孤立性LGPIN、HGPIN预测继发前列腺癌的单、多因素Logistic回归分析

3讨论

通过原位杂交法对PIN标本和前列腺癌标本的研究结果显示，相比于HGPIN和LGPIN，前列腺癌的PSCA mRNA表达的密度、强度均显著上升〔4〕。HGPIN中PSCA mRNA表达的上升很可能是前列腺癌的发展进程中的早期事件之一〔5〕。PSCA mRNA表达的水平与前列腺肿瘤的病理机制相关，且有望对孤立性PIN发展成前列腺癌所存在的风险进行预测〔6〕。

在临床上，对孤立性PIN进行穿刺活检的意义主要是在其之后的活检过程中可以发现存在的前列腺癌，故这种识别孤立性PIN可能发展为前列腺癌患者有着非常重要的价值〔7〕。虽然最近在临床上有着重要参考价值的DRE和血清PSA结果被大量评估，用以对孤立性PIN继发为前列腺癌的风险进行预测，但是目前研究结果尚不一致。本研究结果发现，在有/没有继发前列腺癌相应的孤立性HGPIN和LGPIN中，血清PSA浓度变化无显著性的意义，说明在发生疾病的过程中，孤立性HGPIN和LGPIN本身并不引起血清PSA浓度显著提高〔8〕。Logistic回归分析显示，6点法活检无法预测孤立性HGPIN患者继发前列腺癌的风险，但是12点法活检却能对此类风险进行有效预测。然而在多变量分析中，这两种方法均无预测价值。因此，在孤立性PIN患者确定发展为临床前列腺癌中，PSCA mRNA的表达水平具有重要的预测作用〔9〕。

本实验中，孤立性PIN患者确诊后发展为前列腺癌需随访≥5年。对PSCA mRNA表达水平与最初的前列腺活检确诊为孤立性的HGPIN和LGPIN患者临床结局间的关系的研究结果显示，在最初的活检PSCA mRNA呈阳性表达的孤立性HGPIN和LGPIN患者中，在随访活检中，均有病例进展为前列腺癌；而呈阴性表达的患者中，在随后至少为5年的随访活检期间，未出现前列腺癌的病例。针对最初活检中有阳性表达的PSCA mRNA的孤立性HGPIN或者LGPIN患者，存在显著进展成临床前列腺癌趋势〔10〕。PSCA mRNA可以作为孤立性HGPIN或LGPIN进展成临床前列腺癌独立的预测指标。

目前尚不清楚PSCA的生物学功能及确切的调控机制。虽然很多因素会调节PSCA表达，但是其表达的重要调节点之一是转录水平。此外，蛋白激酶C和细胞与细胞间的联系也可能介导或参与PSCA的表达。PSCA同源物呈现出多样化的功能，与致癌作用也有关联。也有学者认为PSCA存在祖细胞样或肝细胞样的功能〔11〕。在PIN细胞中，PSCA的表达可能影响细胞增殖和转化，从而在前列腺癌发生、发展中发挥重要意义。

参考文献4

1Kohaar I,Porter-Gill P,Lenz P,etal.Genetic variant as a selection marker for anti-prostate stem cell antigen immunotherapy of bladder cancer〔J〕.J Natl Cancer Inst,2013;105(1):69-73.

2Ren J,Zhang Z,Wang F,etal.MRI of prostate stem cell antigen expression in prostate tumors〔J〕.Nanomedicine (Lond),2012;7(5):691-703.

3Feldmann A,Arndt C,Topfer K,etal.Novel humanized and highly efficient bispecific antibodies mediate killing of prostate stem cell antigen-expressing tumor cells by CD8+and CD4+T cells〔J〕.J Immunol,2012;189(6):3249-59.

4Pacheva IH,Milanov IG,Ivanov IS,etal.Diagnostic value of combinations of symptoms of migraine and tension-type headache included in the diagnostic criteria for children and adolescents in the International Classification of Headache Disorders 2nd Edition〔J〕.Folia Med (Plovdiv),2013;55(3-4):46-55.

5Wang T,Zhang L,Li H,etal.Prostate stem cell antigen polymorphisms and susceptibility to gastric cancer:a systematic review and meta-analysis〔J〕.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2012;21(5):843-50.

6Gao X,Luo Y,Wang Y,etal.Prostate stem cell antigen-targeted nanoparticles with dual functional properties:in vivo imaging and cancer chemotherapy〔J〕.Int J Nanomed,2012;7:4037-51.

7Atala A.Prostate cancer targeting motifs:expression of alphanu beta3,neurotensin receptor 1,prostate specific membrane antigen and prostate stem cell antigen in human prostate cancer cell lines and xenografts〔J〕.J Urol,2012;188(5):2014-5.

8Gu X,Zhang W,Xu L,etal.Quantitative assessment of the influence of prostate stem cell antigen polymorphisms on gastric cancer risk〔J〕.Tumour Biol,2014;35(3):2167-74.

9Fonge H,Leyton JV.Positron emission tomographic imaging of iodine 124 anti-prostate stem cell antigen-engineered antibody fragments in LAPC-9 tumor-bearing severe combined immunodeficiency mice〔J〕.Mol Imaging,2013;12(3):191-202.

10Ruan Y,Yu W,Cheng F,etal.Detection of prostate stem cell antigen expression in human prostate cancer using quantum-dot-based technology〔J〕.Sensors (Basel),2012;12(5):5461-70.

11Taeb J,Asgari M,Abolhasani M,etal.Expression of prostate stem cell antigen (PSCA) in prostate cancer:a tissue microarray study of Iranian patients〔J〕.Pathol Res Pract,2014;210(1):18-23.

〔2014-09-19修回〕

(编辑苑云杰)

基金项目：安阳市科技攻关计划项目(No.2008032031)

中图分类号〔〕R737.25〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2015)21-6133-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.21.061