王　新，易思萌,，刘慧芳,，马　凯，范君文，马雨楠，游　颖，孙兆增

(1. 青岛农业大学，青岛　266109； 2. 军事医学科学院实验动物中心，北京　100071)



猕猴B病毒囊膜蛋白gD基因真核细胞表达载体的构建及表达

王新1，易思萌1,2，刘慧芳1,2，马凯1，范君文2，马雨楠2，游颖2，孙兆增2

(1. 青岛农业大学，青岛266109； 2. 军事医学科学院实验动物中心，北京100071)

【摘要】目的构建猕猴B病毒囊膜蛋白gD的真核表达载体，并且检测其在293T细胞内的表达情况。 方法 首先通过基因合成手段获得含B病毒gD蛋白的基因片段，在经由PstⅠ和NotⅠ双酶切后连接到pEGFP-N3载体，随后将构建的pEGFP-N3-GD重组质粒转染到人胚胎肾上皮细胞系293T细胞。再用Western blot检测所提蛋白其在细胞内的表达情况，并用激光共聚焦分析其在细胞内的表达定位情况。 结果 成功获得携带gD基因的阳性重组质粒pEGFP-N3-GD，且pEGFP-N3-GD重组质粒能在293T细胞的表面正常表达。 结论 利用真核表达系统，既能够在细胞表面产生B病毒gD蛋白的特异性重组抗原，而且可用于B检测抗原的制备。

【关键词】猕猴B病毒；gD蛋白；载体构建；真核表达

Construction of eukaryotic vector of monkey B virus

猴B病毒，也叫猴疱疹病毒I型(cercopithecine herpesvirus I)，α-疱疹病毒亚科，单纯疱疹病毒属。和它同一种属的还有会引起人口腔溃疡的单纯疱疹病毒1型病毒(herpes simplex type 1, HSV-1)和人生殖器疱疹病毒HSV-2[1-3]。B病毒主要自然宿主是猕猴等灵长类动物，感染率极高，它可使恒河猴引起一过性的疱疹样口炎，于7～14 d内自愈，但却能使人类等非自然宿主动物出现致死性的脑炎或上行性脑脊髓炎(死亡率超过70%)[1-3]，正是由于其对人生命安全的高度威胁性，而被归于生物安全4级病原。……