柯　志，周冬梅，徐　军，孙文正，杨　彬

(广东东阳光药业有限公司，广东　东莞　523867)



毛细管区带电泳检测抗EGFR抗体的电荷异质性

柯志，周冬梅，徐军，孙文正，杨彬*

(广东东阳光药业有限公司，广东东莞523867)

单克隆抗体凭借其高特异性和低副作用的优点成为生物药研究的热点[1]。抗体在生产和储存过程中，自身的翻译后修饰和储存条件会影响其电荷异质性[2]，如琥珀酰亚胺修饰[3]、C末端赖氨酸修饰、酰胺化、氧化会产生碱性变体[4]，脱酰胺、唾液酸化、焦谷氨酸环化[5]会产生酸性变体。除此之外，片段化会双向产生酸碱变体，异天冬氨酸化会影响表面电荷分布[6]。这些变体不仅可能影响抗体的生物活性，还可能影响抗体的稳定性。同时，电荷异质性作为生物药物的关键质量属性，是进行克隆筛选[7]、衡量生产工艺、工厂生产批次放行和稳定性实验的重要指标。因此，需要建立一种快速且稳定的方法对其进行分析。

单抗电荷异质性最常用的检测方法有等电聚焦(IEF)、离子交换色谱[8](IEC)、毛细管等电聚焦电泳[9](CIEF)、成像毛细管电泳(iCE)[10]及毛细管区带电泳[11](CZE)等。IEF是检测单抗电荷异质性的传统方法，该方法分辨率高，但耗时长且变异性高。目前较多用于单抗电荷异质性的检测方法为IEC和毛细管电泳法(CE，包括CIEF、iCE、CZE)。CE法因柱效高、进样量少、分离度好而成为单抗分析的常规手段[12]。CIEF分辨率高同时能精确测定PI值，但其两步分离耗时长[13]；具有相似分离原理的iCE只需一步聚焦，能显著减少分析时间，但与CIEF一样，其涂层毛细管使用寿命短，且所用两性电解质以及分离液成本高，从而限制了这两种方法的使用。……