陆丹倩，芮勇宇，杨 秋，顾向明，邓 冲，王巧媚，邓聚辉

(1．广东省中山市中医院检验科，广东中山 528400；2.南方医科大学南方医院，广州 510515)

鲍曼不动杆菌(acinetobacterbaumannii，Ab)是一种专性需氧的非发酵革兰阴性球杆菌，属于条件致病菌，引起多重耐药并体外生存时间长(数月)，易造成流行，对其临床治疗造成较大的困难。鲍曼不动杆菌的耐药机制主要是产碳青霉烯酶水解酶，碳青霉烯酶按Ambler法，分为A，B和D三类，本文主要是中山市中医院2012～2013年临床分离出的40株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)进行B类金属酶、D类苯唑西林酶以及ERIC-PCR法聚类分析的研究，以了解我院CRAB的耐药机制及流行克隆的情况。

1 材料与方法

1.1 研究对象 40株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌来自我院2012年7月～2013年12月住院患者送检痰液29份、伤口分泌物9份、血液及尿液各1份标本，其中临床分布ICU 18株、内科10株、骨科7株及外科5株，同一患者留取初次分离菌株。

1.2 仪器及试剂 美国BD公司PhoenixTM100全自动细菌及药敏鉴定仪，PCR扩增仪器(德国Eppendorf)，凝胶成像仪(Bio-Rad)。dNTPs TaqDNA聚合酶、蛋白酶K和DNA Marker由大连瑞真生物技术有限公司提供。PCR引物由上海英潍捷基贸易有限公司合成。Tris饱和酚、氯仿、异戊醇、10%十二烷基磺酸钠由北京鼎国生物技术有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 细菌DNA模板制备：用SDS-蛋白酶K-酚-氯仿方法提取，加入适量缓冲液III(10 mmol/L Tris-HCl pH8.0，1 mmol/L EDTA)溶解DNA沉淀，-20℃保存备用。

1.3.2 PCR方法检测常见碳青霉烯酶基因：PCR分别检测B类金属酶基因NDM，VIM，IMP[1]，多重PCR同时扩增D类OXA类酶基因OXA-23-like，OXA-24-like，OXA-51-like，OXA-58-like 4个基因[2]。

1.3.3 ERIC-PCR：进行ERIC-PCR基因分型[3]。1.5 g/dl琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。利用Quantity one 软件进行ERIC-PCR图谱的分析。……