许宏涛，陈东科，赖惠英(北京医院检验科 国家老年医学研究中心，北京 100730)

利奈唑胺(linezolid，LZD)是一种新型恶唑烷酮类抗生素，2000年在美国上市，主要应用于万古霉素耐药肠球菌(VRE)、甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)、青霉素耐药链球菌等多重耐药革兰阳性球菌的治疗。因为自然界中缺乏天然耐药基因库，理论上不易出现利奈唑胺耐药；但事实并非如此，2001年美国哈弗大学医学院报道了第一株利奈唑胺耐药的MRSA[1]。而后，多个国家出现了利奈唑胺耐药葡萄球菌的暴发性流行。我们收集了2012年1月～2014年12月我院临床标本中出现的6株利奈唑胺耐药革兰阳性球菌，对分子流行病学及其主要耐药分子机制进行了初步研究。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 收集2012年1月～2014年12月我院临床标本中对利奈唑胺耐药的革兰阳性球菌6株，经过VITEK2 COMPACT鉴定5株为柯氏葡萄球菌、1株为粪肠球菌。

1.2 试剂 KB法药敏纸片为英国Oxoid公司产品；MH培养基干粉及E-test药敏条为法国生物梅里埃公司产品；Vitek-2 Compact全自动细菌鉴定仪购自法国生物梅里埃公司；ABI-2400 PCR仪购自美国ABI公司；细菌基因组DNA提取试剂盒购自凯捷公司；TaqDNA聚合酶、dNTP和DNA分子量Marker购自日本TaKaRa公司。PCR引物合成由北京赛百盛公司完成。

1.3 药敏试验 采用E-test法检测利奈唑胺、青霉素、苯唑西林、头孢西丁、万古霉素、替考拉宁、环丙沙星、红霉素、四环素、氯霉素的MIC；药敏方法和折点判断参照CLSI 2012，以ATCC29213作为质控菌株。

1.4 利奈唑胺耐药基因及相关突变检测 细菌基因组DNA提取应用凯捷公司的基因组提取试剂盒，23Sr DNA V区域引物及4个拷贝基因片段引物[2]，L3和L4[3]，cfr[4]基因扩增条件及引物序列参照文献进行，引物序列见表1；……