■王秋菊 王爽云 王秋云 马凤学 沈 丹 杨玉梅 龚 高 唐小彪

（1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆 163319；2.辽宁省阜新市育才中学，辽宁阜新 123000）

（参考文献15篇，刊略，需者可函索）

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验菌株

2014～2015年度，黑龙江八一农垦大学动物科技学院微生态实验室已知具有产生谷氨酸功能性的芽孢杆菌，优选其中5株芽孢杆菌为试验菌进行耐受稳定性研究。

1.1.2 培养基

营养肉汤LB培养液：根据说明书，按计量称取培养基，用蒸馏水加至500 ml。121℃高压灭菌20 min。

营养琼脂平板/斜面：根据说明书，按计量称取培养基和定量的琼脂，用蒸馏水加至500 ml。121℃高压灭菌20 min。

1.1.3 原种液的培养

①复苏：将芽孢杆菌斜面的菌全部溶于5 ml LB培养液中，37℃振荡培养24 h。

②原种液培养：将复苏的芽孢杆菌菌液，按4%(v/v)的接种量接至各自新鲜LB液体培养基中，37℃振荡180 r/min培养48 h。备用。

茶叶：茶叶样品于2017年10月21日采摘于漳州科技职业学院相同区域实训茶园，采摘量均为1 000 g，具体信息见表1。

1.1.4 活性菌液的制备

将筛选出芽孢杆菌原种液，按4%(v/v)的接种量，将200μl原种液分别接入5 ml新鲜LB液体培养基中，37℃振荡培养24 h，使其菌液浓度达到108cfu/ml，为第1代培养液；取200μl第1代培养液接入5 ml新鲜LB液体培养基中，37℃振荡培养24 h，为第2代培养液；以此类推，制备各芽孢杆菌第20代培养液。

1.2 试验方法

1.2.1 芽孢杆菌耐酸性的测定

将芽孢杆菌1代和20代发酵液200μl，按4%(v/v)的接种量，接入5 ml pH值分别为1.5、2.5、3.5、4.5、6.0的新鲜LB培养液中，37℃振荡培养24 h，分别无菌取出培养菌液进行10倍比稀释，取10-4稀释梯度的稀释菌液100μl，于LB平板上，进行涂布，37℃培养24 h，菌落计数。……