■李晨曦 赵国芬

（内蒙古农业大学生命科学学院，内蒙古呼和浩特 010010）

共轭亚油酸（conjugated linoleic acids,CLA）是指一组含有共轭双键的亚油酸几何位置异构体。共轭亚油酸具有抗癌、抗动脉粥样硬化、抗糖尿病、消除炎症和抗肥胖等有益的功效[1]。但其在天然食品中的含量较低，如何获得安全高效的生产方法显得尤为重要。亚油酸异构酶（linoleate isomerase,LA）是一种能够催化亚油酸生成共轭亚油酸的酶，获得高活性的亚油酸异构酶是生产高活力、高纯度共轭亚油酸的瓶颈。许多微生物体内有亚油酸异构酶，但这些微生物大多是厌氧菌，直接用这些微生物发酵生产CLA，条件难以控制；LAI为胞内酶，产量低，且结合在细胞膜上，分离纯化困难，制约了酶法生产CLA。所以，利用基因工程手段构建高效表达亚油酸异构酶基因的工程菌株[2]来获得LAI显得尤为重要。前人构建的重组工程菌株中，以重组植物乳杆菌亚油酸异构酶基因占多数，且大多数为原核表达系统[3]，表达的酶活也不十分理想。而酵母是低等真核生物，除具有大肠杆菌的生长快、易培养、遗传操作简单优点外，还具有真核生物对蛋白质的正确加工、修饰、以及空间折叠等功能，克服大肠杆菌表达系统的不足。因此通过实验构建酵母表达载体[4-6]，为进一步转化酵母工程菌实现体外表达提供了必要条件，并为将构建高产CLA基因工程菌株大规模应用在饲工业生产中奠定基础[5]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种和克隆载体质粒

植物乳杆菌P-8(本实验室保存）、大肠杆菌DH5ɑ感受态（鸿之惠商贸有限公司）、酵母穿梭质粒pKLAC1（上海捷瑞生物工程有限公司）。……