傅静 谭艳平 刘学群 王春台

摘要：将水稻目地基因Rf6连接到载体PMD-18T上，测序正确后将目的片段连接到含有GST标签的pGEX-6P-1原核表达载体上，确认正确的重组质粒转化到BL21菌株;通过LB培养至对数生长期后，加入IPTG进行诱导表达，经SDS-PAGE和Western Blot检测是否诱导出目的条带，并且经过Glutathione Resin亲和层析系统纯化及检测。结果表明，20 ℃，4 h，0.3 mmol/L IPTG条件下可诱导出可溶性蛋白，经纯化得到可溶性带GST标签的融合蛋白。

关键词：水稻;恢复基因（Rf6）;融合蛋白GST-RF6;原核表达

中图分类号：S511;Q78        文献标识码：A      文章编号：0439-8114（2015）23-6047-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.23.064

Prokaryotic Expression，Purification of Fertility Restoration Protein for HL-type Cytoplasmic Male Sterility in Rice

FU Jing， TAN Yan-ping， LIU Xue-qun， WANG Chun-tai

（HuBei Provincial Key Laboratory for Protection and Application of Special Plants in Wuling Area of China/Key Lab for Biotechnology of State Ethnic Affairs Commission， College of Life Science， South-Central University for Nationalities， Wuhan 430074， China）

Abstract：To achieve activated fertility restorarion protein in vitro， the gene of rice was cloned into PMD-18T for sequencing. Then the gene was connected with prokaryotic expression vector pGEX-6P-1 containing the GST-tag and the recombinant prokaryotic expression vector was transformed into E.coli strain BL21. The GST-tagged fusion protein was induced with IPTG in E.coli strain BL21，and confirmed by SDS-PAGE and Western Blot analysis. The results showed that of the soluble fusion protein was induced by 0.3 mmol/L IPTG at 20 ℃ for 4 h， was and purified by Glutathione resin.

Key words：rice; Fertility restoration-6（Rf6）; GST-Rf6 fusion protein;prokaryotic expression

细胞质雄性不育（Cytoplasmic male sterility， CMS）不能产生有功能的花粉且具有母性遗传的特征[1]。CMS是线粒体不育基因和核基因的互作所致[2]。一方面，在高等植物中CMS普遍存在[3-5]，其作为农作物杂种优势利用的基础，具有极其重要的生产利用价值;另一方面，它又是研究细胞质遗传、核质互作和花药发育的好材料[6]。

三系杂交水稻中，国际公认的细胞质雄性不育水稻类型主要有包台型、红莲型和野败型3种。20世纪70年代初，武汉大学[7]采用常规水稻与野生稻品种互为父母本进行大量杂交，培育出红莲型杂交水稻。多年来，红莲型杂交水稻已经在基础性研究、应用性研究和产业化等多方面取得了重要进展。

Huang等[8]发现只含有一个育性恢复基因Rf5或Rf6的杂交F1代花粉只有50%是正常可育，然而同时含有Rf5和Rf6的群体花粉有75%是正常可育，并对F2和BC1F1遗传群体分析揭示Rf5与Rf6是两个非等位基因，Rf6位于第8号染色体短臂的标记RM7037和RM22355之间。Rf5与Rf6分别独立恢复HL-CMS水稻，模式是配子体恢复模式。……