张 伟，彭大云，周永梅，赖续文

Leica ST5020全自动染色机在常规病理中的应用

张 伟，彭大云，周永梅，赖续文

介绍了Leica ST5020全自动染色机在石蜡切片苏木精－伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色及细胞学涂片巴氏染色中的应用体会。根据Leica ST5020全自动染色机能够针对石蜡切片和细胞学涂片编写相应的程序并进行染色的原理以及全自动染色机智能化的设计，解决了以往传统手工染色繁琐、费时费力、质量不稳定等问题，提高了切片的染色质量，有助于病理医生做出准确、快速的诊断。

全自动染色机；苏木精－伊红染色；巴氏染色

0 引言

随着医学技术的快速发展和自动化仪器应用的普及，病理科常规染色从繁琐的人工染色发展到全自动染色机批量产出。全自动组织切片染色机避免了人工染色中的随意性、工作效率低、质量不稳定等因素的影响，逐渐为各大医院病理科及相关实验室所接受并使用[1]。我科引进Leica ST5020全自动染色机应用于常规苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色及细胞学涂片巴氏染色，因其设计的工作环境及试剂质量和国内有一定的差异，开始使用时按照出厂设计，染色效果不尽如人意。在使用过程中我们根据国内试剂标准和工作环境，摸索制定了新的染色程序及试剂的使用管理程序，切片的处理效率明显提高，染色质量效果稳定，现将使用体会报告如下。

1 Leica ST5020全自动染色机

ST5020是德国Leica公司生产的全自动染色机，设备由软、硬件2个部分组成，软件系统通过彩色薄膜晶体管（thin film transistor，TFT）触摸屏来实现各种程序的操作。各染色程序的设定通过不同颜色显示在“程序”菜单，对不同的染色程序，仪器通过玻片入口处的感应装置自动感应不同颜色的夹子后执行相应的染色程序。配有试剂管理系统，该系统日志列出了所有的试剂站点以及每一站点上分配的试剂及其运行过程。试剂更换可根据染色架数目、天数设定试剂管理阈值，提高了试剂的利用率，尤其是在产出的样本片数和连续加载容量上尤为突出，最少200片/h（依据程序最多可达900片/h），加载容量最大量可达12架（同时可拥有4种不同的染色程序）。硬件系统有机械臂、炭滤器和40个试剂站点，试剂容量为450 mL。在使用管理上，仪器设立了访问级别、操作员和管理员，操作员只能操作仪器，管理员负责输入密码进入管理级别、设定和更改操作程序。

2 使用方法

2.1 仪器与设备

德国Leica ST5020自动染色机和CV5030自动盖片机及附带设备。

2.2 试剂

改良Harris苏木素[2]、1%醇溶性伊红[2]、EA50染色液、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、1%盐酸乙醇、1%氨水、苯酚（石炭酸）二甲苯（1∶3）混合液。

2.3 方法

2.3.1 常规石蜡切片

HE染色[2-3]，石蜡切片厚3 μm，裱帖在载玻片上，在载玻片的磨砂面正确标出组织块的编号，放入染色机配套的玻片篮中，以红色玻片篮配套头为HE染色程序标记，即可上机染色，程序见表1。

程序完成后自染色出口处取出切片，置入CV5030自动盖片机中，使用中性树胶封固。

2.3.2 脱落细胞学涂片巴氏染色

将涂片放入染色机配套的玻片篮中，以黄色玻片篮配套头为巴氏染色程序标记，即可上机染色[3]，程序见表2。

表1 常规石蜡切片HE染色

表2 脱落细胞学涂片巴氏染色

程序完成后自染色出口处取出切片，置入CV5030自动盖片机中，使用中性树胶封固。

3 结果

石蜡切片HE染色及脱落细胞学涂片巴氏染色透明性好、鲜艳、均匀、胞核和胞质着色良好、对比清晰。

4 讨论

4.1 病理制片质量开始标准化

随着病理切片质量控制的深入开展，病理制片质量逐渐标准化。传统的组织切片染色多为人工处理，常靠经验控制，操作繁琐、费时费力，受人为因素影响较大，逐渐被自动染色机所代替。全自动组织切片染色机通过计算机的精确编程设计，处理程序操作，确保了切片染色质量的高效、稳定，同时降低了工作强度，大大改善了工作环境，避免了病理技术员长期接触有害的二甲苯[4]。病理切片水平由传统的经验控制转变为科学的质量控制。自动染色机和自动盖片机能让操作者在进行切片、贴片的同时，自动完成染色盖片[5]。每个玻片篮可放置30张载玻片，每张载玻片上可裱贴2个组织块切片，可进行大批量玻片的染色，而且可同时设制多个染色程序，石蜡切片HE染色与脱落细胞学的巴氏染色2种不同的染色程序可同时进行，总体效率得到了提高。染色机的各步骤由计算机控制，各步骤所设定时间精准，在计算机程序设定控制下，自动感应染色架上不同颜色的夹子，执行相应的染色程序，不会因操作者的不同而出现明显的波动[6]。染色机的机械臂起落都相对平稳缓慢，减少了试剂间的相互污染，水流冲洗环节的水通过底部的自动出水阀平缓控制水压，使流水自下而上地平稳流出，而且溢水口设在上端，底部流水冲洗更加彻底，几乎不会出现掉片现象，染色效果更稳定。染色盖片的过程中，对人体影响最大的是二甲苯，由于染色机和盖片机的操作是在相对封闭的状态下，而且通过装有炭滤器的排气口，减少了有毒气体对工作环境的污染，安全性较好。

4.2 试剂使用

为保证切片良好的染色对比度，我们采用改良Harris苏木素作为细胞核染液。优点是试剂配后即可使用，染色力强，染色时间只需5 min。细胞核返蓝上增加了1%氨水，缩短了流水返蓝的时间。胞浆染色采用1%乙醇伊红，染色时间短、色彩鲜艳。为防止切片脱水不充分，我们在酒精和二甲苯之间设置了1∶3的苯酚二甲苯，这样避免了南方因天气潮湿切片模糊发白的现象，增加了切片脱水透明的效果。细胞学涂片染色采用巴氏染色，染色具有多色性，适用于上皮细胞染色，尤其适于观察鳞状上皮细胞的分化程度以及阴道涂片观察女性激素水平。

4.3 试剂更换

每天开机前定时检查试剂量，根据试剂管理系统日志，失效试剂须及时更换[7]。根据我科试剂管理的具体情况设定天数，苏木素每2周过滤1次，每月更换；伊红每周用中性滤纸过滤后，加入等量的新的染液后继续使用，可连续使用5～6周；脱蜡的二甲苯及水化的梯度乙醇每周全部更换；脱水透明的液体更换可采用前移法，即废弃第一缸乙醇或二甲苯，将后面的依次前移，只在最后一缸相应的乙醇或二甲苯槽中加入新的液体；蒸馏水须每日更新。为保证流水冲洗的质量，我们设定专门的流水冲洗程序，每天染色前完成该程序，保证每个冲水槽都流水通畅，保证染色质量。

4.4 仪器的保养

机器外部每天进行常规的清洁，每天染色结束后，内部染色缸之间的溢液应及时用纱布吸干后再用酒精擦拭，水洗槽应每日将水放尽。每周清扫一次装置的染液台架，取出染液槽时，注意各槽的槽位置，打扫后放回原处，用抹布擦拭。水槽底部的进水孔每周用毛刷清洗干净，排水孔每周清洗，防止生霉、堵塞，影响染色质量。一般每2个月全面清洁一次染色机，定时更换碳滤器。总之，机器的维护与保养不可忽视，必要时应与厂家服务人员联系进行专业维护与保养[8-9]。

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[1]马恒辉，章如松，周航波，等.全自动染色机在常规染色中的应用[J].中华病理学杂志，2006，35（3）：183-184.

[2]龚志锦，詹镕洲.病理组织制片和染色技术[M].上海：上海科学技术出版社，1994：48-53.

[3]Carson F L，Hladik C.Histotechnology：a self-instructional text[M]. 2nd ed.Chicago：American Socity of Clinical Pathologists Press，1996：86-87.

[4]刘泳冬，董愉，车丽洪.全自动染色机在常规HE染色中的应用体会[J].实用医技杂志，2007，14（12）：1 585-1 586.

[5]孔静萍，王红卫，张雯静，等.Leica自动染色机盖片机的使用体会[J].现代实用医学，2008，20（6）：482.

[6]胡维维，李广民，段光荣，等.研制改造全自动病理组织染色机[J].诊断病理学杂志，2000，7（4）：74.

[7]董芳，姜卫国，赵晓东.HE自动染色机应用体会[J].中华病理学杂志，2004，33（2）：179-180.

[8]王伯云，李玉松，黄高昇，等.病理学技术[M].北京：人民卫生出版社，2000：130-140.

[9]张秀智，赵焕芬，徐明堂，等.全自动染色机染色过程中伊红染液的应用体会[J].临床与实验病理学杂志，2013，29（2）：218-219.

（收稿：2014-07-17 修回：2014-10-20）

（栏目责任编校:李 影）

Application of Leica ST5020 automatic staining machine in pathological staining

ZHANG Wei,PENG Da-yun,ZHOU Yong-mei,LAI Xu-wen
(Department of Pathology,Guangzhou General Hospital of Guangzhou Military Area Command,Guangzhou 510010,China)

The experience of applying leica ST020 staining machince to HE staining and Pap staining of cytologic smear was introduced.Leica ST5020 automatic staining machine can realize HE staining of paraffin section and Pap staining of cytologic smear,with corresponding procedures prepared for the staining of paraffin section and cytologic smear.The implementation of automatic and intelligent staining eliminates the defects due to manual operation,and thus contributes to the rapid and accurate diagnosis by the pathologist.[Chinese Medical Equipment Journal，2015，36（6）：127-128，139]

automatic staining machine;HE staining;Pap staining

R318.6；TH776

A

1003-8868（2015）06-0127-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2015.06.127

张 伟（1972—），男，主管技师，主要从事临床病理技术方面的研究工作，E-mail:ZW54177@126.com。

510010广州，广州军区广州总医院病理科（张 伟，彭大云，周永梅，赖续文）