梁君铭曾 宽邹堂斌

S1P通路在胆盐所致HL-7702细胞毒性损伤中的作用*

梁君铭①曾 宽②邹堂斌③

目的：探讨S1P通路在胆盐所致HL-7702细胞毒性损伤中的作用。方法：应用甘氨鹅脱氧胆酸盐（GCDC）处理HL-7702细胞建立胆盐损伤肝细胞模型，应用CCK-8试剂盒-8检测细胞存活率，ELISA方法检测细胞培养上清液S1P的表达，Western blot法测定caspase-3蛋白的表达水平。结果：应用150 μmol/L GCDC处理HL-7702细胞24 h可引起毒性损伤，10 μmol/L VPC23019（S1PR1抑制剂）预处理30 min可对抗GCDC引起的损伤，使细胞存活率升高，凋亡细胞数目和cleaved caspase-3表达均减少。结论：GCDC可以引起HL-7702细胞毒性，S1P通路介导GCDC对HL-7702细胞的损伤作用。

甘氨鹅脱氧胆酸盐； 凋亡； S1P； SphK1激酶； HL-7702细胞

胆汁淤积性黄疸病因复杂，能引起肝脏等损害，胆汁淤积胆酸盐所致肝实质细胞毒性损伤是胆汁淤积性黄疸肝损害的重要机制[1-3]。其中甘氨鹅脱氧胆酸盐（Glycochenodeoxcholate，GCDC）是引起肝细胞损伤的主要胆汁酸，在胆汁淤积性黄疸时浓度升高最为明显[4]。新近研究表明，鞘磷脂在肝脏生理和病理中有重要作用，1-磷酸鞘氨醇（sphingosine-1-phosphate，S1P）是鞘磷脂的重要代谢产物，而鞘氨醇激酶（Sphingosine kinase，SphK）是调控鞘脂代谢平衡的关键酶，S1P信号通路可能参与肝癌、胆汁淤积所致肝实质细胞损伤，但是S1P信号通路与胆汁淤积胆酸盐引起肝脏实质细胞损伤的机制尚不明确[1-3]。因此，本研究在HL-7702细胞建立胆酸盐损伤细胞模型，探讨S1P信号通路在GCDC损伤HL-7702细胞中的作用及其有关机制[2]。

1 资料与方法

1.1 一般资料 GCDC和VPC23019购自美国Sigma-Aldrich公司，CCK-试剂盒-8购自日本Dojindo公司，DMEM-F12培养基以及特级胎牛血清FBS购自美国Gibco BRL公司，Cleaved-caspase-3抗体购自美国Cell Signaling Technology公司，S1P ELISA测定试剂盒购自上海前尘生物科技有限公司，人HL-7702肝细胞株购自深圳市百恩维生物科技有限公司。……