陈建华徐玉琴杨晋辉张军

·论著·

间充质干细胞移植治疗终末期肝病前后血清甲胎球蛋白的变化

陈建华1★徐玉琴2杨晋辉3张军4

目的探讨间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）移植治疗终末期肝病甲胎球蛋白（α-fetoprotein，AFP）的变化，观察病人肝功能有无改善。方法MSC移植治疗73例终末期肝病患者，其中包括失代偿期肝硬化患者45例，慢性重症肝炎5例，监测疗前和疗后1周、疗后1个月、2个月AFP及肝功能变化。结果疗后1周AFP较疗前明显升高，其后降低，2个月至疗前水平，差别有统计学差异（P＜0.05）。白蛋白（serum albumin，ALB）疗后1月、2月与疗前相比，差别有统计学意义（P＜0.05）。胆碱酯酶疗后2月较疗前明显升高，差别有统计学意义（P＜0.05）。所有接受干细胞移植的患者观察过程中未出现肝脏及其他器官肿瘤。结论MSC移植治疗终末期肝病患者安全有效。

间充质干细胞（MSC）；移植；甲胎球蛋白（AFP）

终末期肝病目前最有效的治疗方法是肝移植，但由于供体来源有限且治疗费用高昂及移植后的排斥反应限制了其临床大规模应用。干细胞临床应用研究是目前国际生物医学领域的前沿科技，被誉为医学史上的第二次革命。近几年的研究表明间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）不仅具有支持造血的功能，而且没有免疫原性，能够诱导免疫耐受，对同种异体免疫反应具有负调节作用，目前已应用于治疗移植物抗宿主病、克罗恩氏病、肝脏纤维化和骨关节损伤等多种疾病［1］。本文采用MSC移植治疗终末期肝病，疗后1周甲胎球蛋白（α-fetoprotein，AFP）明显升高。为了解其转归及对患者的影响，笔者收集MSC治疗终末期肝病相关资料，观察治疗前后AFP和肝功能变化，探讨MSC治疗的临床效果及治疗过程中AFP的发展变化。

1 数据和方法

1.1 病例来源

于2009年1月至2012年10月收集昆明医学院第二附属医院肝病科MSC治疗肝硬化患者23例、哈尔滨211医院肝病科MSC治疗肝硬化患者45例，慢性重症肝炎5例，通过病史及临床症状、相关实验室检查确诊病例。患者年龄22～73岁（46.74±11.01）岁。

纳入标准：（1）所有病例诊断均符合《肝脏病和感染病诊疗指南2010》。（2）年龄18～75岁的男性或女性。（3）半年内没有使用过MSC治疗。（4）理解并签署知情同意书者。

排除标准：（1）恶性肿瘤患者或血液系统疾病。（2）过敏体质、曾有对血制品过敏史。（3）孕妇、哺乳期妇女。（4）合并腹腔、肺部或其它系统感染。（5）心、肺、肾等重要脏器功能不全或衰竭以及不能配合治疗者。

1.2 实验方法

收集患者一般临床数据，术前实验室检查包括血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、血浆ALB、凝血酶原时间、国际标准化率、血氨、AFP。患者入院后均行内科治疗，包括护肝、对症治疗等。脐带来源的MSC由深圳市北科细胞工程研究所实验室制备提供。治疗前1周、疗后1周、疗后1个月、疗后2个月检测血液中肿瘤标记物AFP含量（化学发光法），并对患者的临床症状、疗效进行观察。

1.3 统计方法

使用SPSS 20.0统计软件包进行处理，计量资料进行描述性统计，变量用（均数±标准差）表示；治疗前后结果比较，因是单因素且在4个时间点进行采样，故采用单因素重复测量方差分析。

2 结果

2.1 MSC移植治疗终末期肝病AFP变化

治疗前后采用重复测量方差分析，Mauchly球形度检验卡方＝21.007，P＜0.01，故用Greenhouse-Geisser进行校正，F＝9.153，P＝0.029，差别有统计学意义（P＜0.05）。从表1可以看出，疗后1周AFP明显升高。

表1 MSC移植治疗终末期肝病AFP变化Table 1 The changes of AFP during MSC transplantation in the treatmentof end-stage liver disease

表2 MSC移植治疗终末期肝病ALB变化Table 2 The changes of ALB during MSC transplantation in the treatment of end-stage liver disease

2.2 MSC移植治疗终末期肝病ALB变化

经重复测量方差分析，Mauchly球形度检验卡方＝0.426，P＞0.05，故用球形检验结果，F＝2.502，P＝0.035，差别有统计学意义。利用Bonferroni多重比较，ALB疗后1月、2月与疗前相比，差别有统计学意义，P＜0.05；疗后1周与疗前相比，差别无统计学意义，P＞0.05。结果见表2。

2.3 MSC移植治疗终末期肝病胆碱酯酶变化

经重复测量方差分析，Mauchly的球形度检验卡方＝13.703，P＝0.019，故用Greenhouse-Geisser进行校正，F＝1.322，P＝0.039，差别有统计学意义。利用Bonferroni两两比较，胆碱酯酶疗后2月与疗前相比，差别有统计学意义，P＜0.05；疗后1周、1月与疗前相比，差别无统计学意义，P＞0.05。结果见表3。

表3 干细胞治疗终末期肝病胆碱酯酶与疗前比较Table 3 The comparison to pretherapy of cholinesterase during MSC transplantation in the treatment of end-stage liver disease

3 讨论

AFP的合成部位主要在啮齿动物及人类胚胎的肝脏，也可在卵黄囊及胃肠道等部位合成，它是啮齿类动物和人胚胎期血清中的主要蛋白成分。人类胚胎在子宫内发育的第6周左右用双向扩散法即能测出AFP，到第13周左右可达到高峰，第16周后AFP的浓度迅速下降而ALB浓度上升；出生后第1周末用双向扩散法即不再能测出AFP［2］。AFP在原发性肝癌或胚胎性癌时增加［3－4］，所以检查AFP在血液中的含量，对这类疾病的发现和诊断有重要意义。动物和人在切除部分肝脏后，组织和血清中AFP的浓度会明显增高。肝组织发生炎症或癌变时，AFP也会升高［5－6］。根据2011年卫生部肝细胞肝癌规范化诊治指南，血清AFP大于400 ng／m L 1个月；或AFP大于200 ng／m L持续2个月，排除妊娠和生殖腺胚胎瘤者，高度警惕肝癌，应通过影像学检查［7］。

本研究采用脐带来源的MSC治疗终末期肝病过程中也发现病人的AFP升高，从表1可知，MSC移植治疗1周后，血液中的AFP明显升高，差别有统计学意义，P＜0.05。血清胆碱酯酶是肝病很好的标记物，有较好的敏感性和特异性，可做为进展期肝病判断预后一个有价值的标记物，其值越低，愈后越差［8］。干细胞移植后，表3结果表明胆碱酯酶与疗前相比，2个月后明显升高，差别有统计学意义。因胆碱酯酶活性是反映肝细胞损害的敏感指标，对估计肝硬化患者肝脏储备功能，了解病情变化及预后判定具有一定临床价值，再结合病人的ALB较疗前也有一定升高，腹水减少，乏力纳差等症状明显改善，表明患者预后向好的方向发展，肝功能得到一定改善。

MSC是一种多潜能干细胞，能自我更新并向不同组织分化，已在不同的动物模型上证实其可向肝原性细胞分化［9］。将人蜕膜来源的MSC与鼠肝匀浆共培养，分析其向肝细胞样形态改变、表型和三维结构，发现其表达肝特异性标记：ALB、肝细胞生长因子受体（hepatocyte grow th factor receptor，HGFR）、AFP和细胞角蛋白-18（cytokeratin-18，CK-18），形成的肝样细胞具有肝细胞的功能：包括糖原的存储和吸收／分泌吲哚菁绿（indocyanine green，ICG）。同时，在共培养过程中，AFP合成减少和ALB合成增加也与正常肝脏器官在胚胎期间发育过程中观察到的一致［10］。当MSC与受伤的肝组织共培养时，甲胎蛋白和白蛋白表达明显升高［11－12］，这和我们观察到的结果一致。

而MSC移植治疗终末期肝病的不良反应，有少数患者会出现低热，体温一般不超过38度，不须特殊处理或仅需对症处理即可，1～3天内症状消失；个别患者出现高热寒战，结合具体临床情况进行处理；偶有恶心和呕吐、腹痛、皮疹发生，经对症处理，均在1～3天内消失［13－14］。

血清AFP测定对急性重型肝炎临床治疗疗效及预后有重要的指导意义。重型肝炎患者血清AFP含量高，则其治疗后肝功能逆转率高；反之，则肝功能逆转率低，预后差［15－16］。Kakisaka等发现除了严重损害的肝脏，AFP在急性肝损伤或急性肝衰竭的病人中明显升高且和细胞角蛋白-7阳性的肝脏前体细胞数目呈现明显的相关性，血清AFP水平可能反映此类病人肝脏前体细胞的诱导，肝前体细胞持续诱导直到足够成熟肝细胞再生可能是急性肝衰竭病人恢复的必要条件。血清AFP可能是急性肝损伤或急性肝衰竭病人肝前体细胞的标记物，若AFP水平低，则这类病人的预后较差［17］，这与我们的报道一致。

尽管MSC移植治疗肝病已取得可喜的成果，但是这些研究尚处于起步阶段，也缺乏合理设计的多中心随机对照临床研究验证疗效及长期随访数据了解移植可能发生的不良反应或并发症。本文的不足之处是收集的数据缺乏长期随访数据，AFP升高的机制需要做进一步研究。尽管如此，仍有理由相信通过深入研究，可以安全地把MSC的基础研究转化为临床应用，为疑难杂症的治疗带来更为广阔的前景。

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The change of serumα-fetoprotein during mesenchymal stem cell transplantation in the treatment of end-stage liver disease

CHEN Jianhua1★,XU Yuqin2,YANG Jinhui3,ZHANG Jun4
(1.Department of Pharmacology,School of Pharmacy,North Sichuan Medical College,Nanchong,Sichuan, China,637000；2.The Infectious Department,No.211 Hospital of the Chinese People's Liberation Army, Harbin,Heilongjjiang,China,150030；3.Digestive Internal Medicine,Second A ffiliated Hospital of Kunming Medical University,Kunm ing,Yunnan,China,650000；4.The Life Health Department of Shen z hen Beike Biotechnology Company,Shenzhen,Guangdong,China,518057)

Objective To explore the changes ofα-fetoprotein(AFP)in end-stage liver disease after mesenchymal stem cell(MSC)transplantation and observe whether patient’s liver function had been improved.

Mesenchymal stem cell(MSC)；Transplantation；α-fetoprotein(AFP)

间充质干细胞临床应用高技术产业化（2011GH021787）

1.川北医学院药学院药理教研室，四川，南充637000 2.哈尔滨211医院感染科，黑龙江，哈尔滨市150030 3.昆明医学院第二附属医院消化内科，云南，昆明650000 4.深圳市北科生物科技有限公司生命健康部，广东，深圳518057

★通讯作者：陈建华，E-mail：623551832＠qq.com

Methods 73 patientsw ith end stage liver disease were transplanted w ith MSC,including 45 decompensated hepatic cirrhosis and 5 chronic severe hepatitis patients.The serum levels of AFP,liver function were examined 1 week before treatment and 1 week,1 month,and 2 months after treatment.Results The level of AFP increased at 1 week after treatment,and returned to normal level 2months later.T here was statistical difference between before treatmentand after treatment(P＜0.05).The results revealed a statistically significant difference between before treatment and after 1,2 months treatment in serum album in(ALB)(P＜0.05).Likew ise,there wa s significant difference between before treatment and after 2 months treatment in Cholinesterase(P＜0.05).No person suffered from any other tumor under thorough observation.Conclusion MSC transplantation is a safe and effective in the treatmentof end-stage liver disease.