尹情胜，王小董，任翠丽

(1.合肥工业大学控释药物研究室;2.安徽中人科技有限责任公司，安徽 合肥 230009)

聚(乳酸—乙醇酸)［poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA］是由乳酸(lactic acid，LA)和乙醇酸(glycolic acid，GA)聚合而成，在生物体内可降解为内源性物质乳酸和乙醇酸，具有良好的生物相容性，无毒副作用，其广泛应用于制药、生物工程等领域［1-3］。PLGA中乳酸、乙醇酸的含量既是优化生产工艺、反映样品纯度的一个重要指标，同时它们也反映PLGA在存贮期间的质量变化和产品的稳定性能。因此有必要建立灵敏的、可靠的乳酸、乙醇酸的测定方法来监测PLGA的质量。高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography，HPLC)是目前测定食品、果汁饮料、生物样品等中乳酸、乙醇酸的较优方法［4-6］。吕兆林等［4］用 HPLC 法测定苹果酒中苹果酸及乳酸的含量，黄光晓等［5］用反相高效液相色谱法测定在乙醇酸甲酯存在下的乙醇酸含量。而将HPLC法用于同时测定PLGA中微量的乳酸和乙醇酸，未见有文献报道。本文建立了HPLC法测定PLGA中乙醇酸、乳酸的方法，并按照相关的技术指导原则［7］进行验证。

1 仪器与材料

1.1 仪器 LC-15C高效液相色谱仪，日本岛津公司;TU-1901紫外可见分光光度计，北京普析通用公司;AE240电子天平，梅特勒公司。

1.2 材料 聚(乳酸—乙醇酸)(25/75)，安徽生建可降解聚乳酸新材料有限公司;乙醇酸、乳酸，分析纯，SIGMA公司;乙腈、甲醇、磷酸均为色谱纯市售试剂;三氯甲烷为市售分析纯;色谱柱，填料Kromasil C18，5 μm，规格 4.6 mm ×250 mm，天津兰博公司。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性 用十八烷基键合硅胶为填充剂，以0.12%(v/v)磷酸溶液—乙腈(98∶2)为流动相，流速为1.00 mL·min-1，检测波长为210 nm，柱温30℃。理论板数按乳酸峰计算不低于2 000。

2.2 PLGA中乳酸与乙醇酸的测定方法 精密称取PLGA约0.1 g，加三氯甲烷4 mL溶解试样，精密加0.12%磷酸溶液1 mL，涡旋5 min，静置，取上清液作为供试品溶液;另取乙醇酸和乳酸适量，精密称定，用0.12%(v/v)磷酸溶液溶解，作为对照溶液。精密量取供试溶液20μL，注入色谱仪，记录谱图。按外标法以峰面积计算样品中乳酸和乙醇酸的含量。

2.3 方法的专属性 按“2.2”项下分别制备空白样品、加标样品、供试样品的溶液，3种样品的色谱图见图1。图1A显示空白样品仅含有1个小杂质峰，图1B显示乳酸、乙醇酸与相邻杂质间两两完全分离，图1C显示供试样品含少量的乳酸、乙醇酸。

2.4 线性与范围 取乳酸、乙醇酸各约20 mg，精密称定，配制系列浓度的标准溶液，测定两酸的峰面积。结果显示乳酸、乙醇酸溶液浓度在0.5～2 000 mg·L-1时，两酸的峰面积(A)对其浓度(C)的线性回归方程分别为A=921C+1 099和A=807C+608，r均为 1.000 0。

2.5 方法的准确度 精密称取PLGA(含LA、GA分别为 0.036%和 0.013%)约 0.1 g，共 9 份，分成3组，各组分别定量加入LA和GA，按“2.2”项下方法制备成低、中、高浓度的加标供试品溶液。按本法测定各样品中LA、GA的量，扣除各样中已有的LA、GA的量得回收量，结果见表1。表1显示低、中、高浓度的加标回收率均在96% ～101%(RSD＜1.0%，n=3)。

2.6 重复性与中间精密度考察 取PLGA约0.1 g，精密称定，按照“2.5”准确度项下的方法制备6份中浓度加标供试品溶液，测定其中乙醇酸、乳酸的含量，考察方法的重复性;另一分析人员同时测定6份，考察方法的中间精密度，结果见表2。结果表明方法的重复性和中间精密度均较好，RSD均小于10%，符合有关物质分析方法的标准规定［9］。

2.7 方法的检测限与定量限 分别称取乳酸、乙醇酸适量，精密称定，用0.12%磷酸溶液逐级稀释成系列低浓度标准溶液，进柱分析。S/N为3时，LA、GA的浓度(即检测限)分别为0.09和0.10 mg·L-1;在S/N约为10，LA、GA相应的浓度为0.38和 0.36 mg·L-1，RSD 分别为 3.2% 和 3.3%(n=6)。

表1 方法的准确度(加标回收率)试验结果

2.8 供试溶液的稳定性 按“2.6”项分别配制中 浓度加标供试品溶液和乳酸、乙醇酸的对照溶液，分别置于4℃冰箱和室温条件下，于1、2、3、5、7 d 时按本法测定。结果表明，乳酸和乙醇酸含量变化的绝对值在±0.1%以内，未出现新的大于报告限度的杂质，符合要求。

2.9 方法的耐用性 按“2.6”项分别配制中浓度加标供试品溶液和乳酸、乙醇酸的对照溶液，在波长变化±5 nm、柱温变化±5℃以及采用三根不同色谱柱的条件下，进柱分析，考察本法的耐用性。结果表明，供试样品中乳酸、乙醇酸含量测定值的相对标准偏差(n=6)均小于2.0%，符合方法学验证要求。

2.10 供试样品测定 取PLGA供试品3批，按照本法测定乳酸、乙醇酸的含量，结果见表3。结果表明，供试样品中乳酸、乙醇酸的含量极低，远小于限度要求。

表2 方法的精密度考察结果/mg

表3 3批PLGA供试品中乳酸与乙醇酸的含量

3 讨论

3.1 色谱条件的确定 乳酸、乙醇酸最大吸收波长分别为210 nm和206 nm，因溶剂在低波长处有较大的吸收，对测定有干扰，选用210 nm作为检测波长。

流动相中用乙腈代替甲醇时，柱效较高。两酸的p K a值分别为3.86和3.83，只有在较低pH溶液中，它们绝大部分才以分子状态存在，峰形对称，柱效较高。但过低的pH值易破坏色谱柱填料，故流动相水系选择pH1.9(0.12%磷酸溶液)。

3.2 供试样品处理方法的优选 三氯甲烷为PLGA的良溶剂，而乳酸、乙醇酸为水溶性的酸。故本文采用三氯甲烷将PLGA溶解，再用0.12%磷酸进行液液萃取。

3.3 PLGA中乳酸和乙醇酸的限度 乳酸、乙醇酸是人体代谢途径的副产物，属内源性物质，因此，它们对人体没有毒性。参照国家食品药品监督管理局颁布的有关PLGA的质量标准［8］，将PLGA中乳酸与乙醇酸的限度分别设定1.5%和0.5%。

［1］李方园，姜永莉，成 颖.PLGA纳米粒抗肿瘤药物载体的研究进展［J］.西北药学杂志，2013，28(6):656-660.

［2］李祥伟，王丽芹，张颖丽，等.载辛伐他汀PLGA缓释微球的制备及表征［J］.口腔医学研究，2013，29(3):217-220.

［3］任翠丽，尹情胜，俞 敏，等.HPLC法测定地塞米松植入剂的含量［J］.安徽医药，2013，17(8):1294-1295.

［4］吕兆林，林 西，邓文红，等.HPLC法测定苹果酒中苹果酸及乳酸含量［J］.精细与专用化学品，2012，20(1):9-13.

［5］黄光晓，徐 艳，赵玉军，等.反相高效液相色谱法测定在乙醇酸甲酯存在下的乙醇酸含量［J］.化学工业与工程，2012，29(1):48-51.

［6］马 瑞，欧阳嘉，李 鑫，等.高效液相色谱法同时测定生物质乳酸发酵液中有机酸及糖类化合物［J］.色谱，2012，30(1):62-66.

［7］黄晓龙.有关物质分析方法验证的可接受标准简介［A］//国家食品药品监督管理局审评中心.药品技术评价文集:第二辑.北京:中国医药科技出版社，2007:114-117.

［8］国家食品药品监督管理局.YBF00042009，乙交酯-丙交酯共聚物(25∶75)［S］.