郑晓青，李 浩

(安徽医科大学第四附属医院，安徽合肥 230022)

复方止颤颗粒由炒白芍、制何首乌、蜈蚣、丹参等十余味药组成，是我院中医科方剂，具有活血化瘀，柔肝通络之功效，临床应用近10年，对于颤病治疗效果良好。何首乌为本方剂中的臣药，而作为何首乌的主要药效成分之一［1－2］，二苯乙烯苷的含量既是药效发挥的关键，也是引起不良反应的基础。《中国药典》规定何首乌中二苯乙烯苷含量不得低于 1.0%［3］。

二苯乙烯苷具有抗氧化、抗衰老、脑保护、降低胆固醇、抑制肿瘤等作用。近年来有报道二苯乙烯苷抗氧化同时能引起肝脏的损伤，是何首乌引起肝毒性的基础［4－7］。因此为提高制剂安全性，减少可能引起的肝脏毒性。本课题组运用超高效液相色谱法(UPLC)对制剂中含量进行测定，以期建立快速、便捷的测定方法，加强医院制剂质量控制。

1 材料与方法

1.1 实验仪器 超高效液相色谱仪(美国Waters公司);超声波清洗仪(江苏昆山超声仪器有限公司);电子天平(百万分之一，德国赛多利斯公司);5 mL容量瓶;圆底烧瓶。

1.2 供试药品 复方止颤颗粒由我院制剂室提供，批号:20130425、20130711、20130906;2，3，5，4'－四羟基二苯乙烯－D葡萄糖苷对照品购自中国药品生物制品检定研究院(批号:110844－200607);甲醇(分析纯);乙腈(色谱纯);乙醇(分析纯);蒸馏水。

1.3 实验方法

1.3.1 色谱条件 色谱柱使用 Acquity BEH C18(2.1 mm ×50 mm，1.7 μm)，流动相为乙腈—水(27∶73)，流速为0.20 mL·min－1;色谱柱温度为25℃;检测波长320 nm。

1.3.2 对照品溶液制备 取二苯乙烯苷对照品适量，精密称定，置5.0 mL容量瓶中，加入甲醇，超声使其溶解，取出放冷至室温，再用甲醇定容至刻度，摇匀得对照品溶液，浓度为0.412 g·L－1，备用。

1.3.3 制备供试品 称取复方止颤颗粒5.0 g，研磨制成粉末状，放置于圆底烧瓶内，加稀乙醇100 mL，精密称定重量，使用超声仪超声处理(功率100 W，频率40 kHz)，1 h后取出，精密称定，用乙醇补足重量，静置，取上清液0.45μm过滤头过滤，制成供试品溶液，备用。同时按照复方止颤颗粒制剂处方的比例制备缺制何首乌的样品，按同样步骤制成阴性对照溶液。

2 结果

2.1 专属性考察 精密吸取对照品、供试品和阴性对照溶液各10μL注入超高效液相色谱仪中，结果显示阴性对照溶液对测定结果无干扰。详见图1～3。

2.2 线性关系考察 精密量取二苯乙烯苷对照品溶液10μL，分别稀释成梯度质量浓度，按照“1.3”项色谱条件进样。以二苯乙烯苷浓度为横坐标，AUC为纵坐标，绘制标准曲线，得二苯乙烯苷的标准曲线方程为 Y=14 332 902.971X－575 593.858(r=0.999 6，n=6)。结果表明二苯乙烯苷在0.124 0～1.030 0μg范围内与其峰面积 AUC 呈良好的线性关系。

2.3 精密度试验 精密吸取二苯乙烯苷对照品溶液10 μL，按照:“1.3”项下色谱条件重复6次，记录峰面积。结果显示精密度RSD为0.04%(n=6)，精密度良好。

2.4 稳定性试验 取同一批供试品溶液，室温下按“1.3”项下色谱条件于 0、2、4、8、16、24 h 进样 10 μL，记录峰面积。RSD 为0.12%(n=6)，结果表明供试品溶液24 h内稳定。

2.5 重复性试验 取同一批次复方止颤颗粒5.0 g，按“2.3”项下制备方法平行制备供试品溶液6份，照“1.3”项下色谱条件，分别精密吸取10 μL，注入色谱仪，记录AUC。结果重复性RSD为0.19%(n=6)，结果表明本方法重复性良好。

2.6 加样回收率试验 取同一批已知含量的样品6份，精密称定重量，分别精密加入二苯乙烯苷对照品适量，按“2.3”项下制备方法制备，照“1.3”项下色谱条件注入色谱仪，记录AUC，计算回收率，结果表明准确度良好，见表1。

表1 加样回收率试验结果(n=6)

2.7 样品含量测定 取3批复方止颤颗粒各5.0 g，按“2.3”项下制备成供试品溶液，照“2.1”项下色谱条件分别进样1.0μL测定，记录峰面积，按标准曲线计算复方颗粒中二苯乙烯苷的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

随着《医疗机构制剂注册管理办法》［8］对医疗机构制剂质量标准要求的提高，不仅需要对制剂中的有效成分含量进行控制，更需要对可能引起药品不良反应的成分进行控制，对于中药复方来说，两者往往是同时存在，发挥着两方面的作用。近年来有关何首乌的肝毒性的报道不断出现于文献中，本制剂采用的为制何首乌，虽尚未见其有关肝毒性的报道，但对其有关成分进行质量控制可有助于提高中药制剂的安全性。

目前对中药复方制剂的含量测定大多采用HPLC法，UPLC法是近些年在HPLC的基础上才发展起来的一种新的方法和技术。与普通HPLC法相比，UPLC法具有分析时间短、分离度高等特点［9］，本文建立了复方止颤颗粒中的二苯乙烯苷超高效液相色谱测定方法，结果表明，4 min即可完成分析，可以在较短的时间内测定制剂中的微量成分，相比文献报道HPLC测定方法需20 min以上［10］，本研究建立的方法大大提高了分析的效率，同时节省溶剂，降低分析成本，可作为复方止颤颗粒的质量控制方法之一。

［1］杨 杰，周芝文，杨期东，等.二苯乙烯苷对脑缺血再灌注大鼠神经保护的作用机制［J］.中南大学学报(医学版)，2010，35(4):321－328.

［2］徐 杰，周文聪，张缓英.何首乌活性成分－二苯乙烯苷的研究进展［J］.泰山医学院学报，2008，29(1):78 －79.

［3］国家药典委员会.中国药典(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:164－165.

［4］高淑红，苏珍枝，肖学凤.制首乌化学成分及药理作用研究进展［J］.山西中医学院学报，2013，13(2):74 －77.

［5］辛淑杰.何首乌的药理作用、临床应用及不良反应［J］.北方药学，2013，10(7):36 －37.

［6］Aleksunes LM，Klaassen CD.Coordinated regulation of hepatic phaseIandⅡdrug－metabolizing genes and transporters using AhR － ，CAR － ，PXR － ，PPARa－ ，and Nrf2 － null mice［J］.Drug Metab Dispos，2012，40(7):1366 －1379.

［7］Sobocanec S，Balog T，Saric A，et al.Cyp4al4 overxpression induced by hyperoxia in female CBA mice as a possible contributor of increased resistance to oxidative stress［J］.Free Radic Res，2010，44(2):181 －190.

［8］国家食品药品监督管理局.医疗机构制剂注册管理办法(试行)［S］，2005－08－01.

［9］汪永忠，姜 蕾，韩燕全，等.超高效液相色谱法同时测定丹蛭降糖胶囊中丹皮酚和芍药苷含量［J］.中国新药杂志，2012，21(12):1337－1340.

［10］洪 燕，韩燕全，陈 杨，等.UPLC法测定黄蒲通窍胶囊中二苯乙烯苷的含量［J］.山西中医学院学报，2013，13(5):28－30.