曾珠，张卫云，魏丽娟

广州军区广州总医院 检验科，广东 广州 510010

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）引起的一种危害人类健康的传染性疾病[5]，全球丙肝感染率约为3%，约1.8亿人感染了HCV，且每年以3.5万人的速度增长[7]，我国估计有3800万感染者。丙型肝炎可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化[1],感染丙肝未及时发现并治疗，20～30 年有10%～20%的患者可发展为肝硬化[6]，到失代偿期，则生存率下降，1%～5%的患者可能发生肝细胞癌而死亡[2]。所以，早期发现和诊断对丙肝患者非常重要。

1 材料与方法

1.1 研究对象

收集2014年4月至2015年3月在广州军区广州总医院住院和门诊病人94 例，其中男性67 例，女性27例；年龄5～87岁，平均年龄51.4±5.2岁。

1.2 标本采集

用干燥管采集患者外周静脉血3～5 mL，用于HCV-RNA 定量、丙肝抗体、白蛋白（albumin，ALB）和谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）检测。

1.3 丙肝抗体的检测

采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测丙肝抗体，试剂由北京万泰生物有限公司提供，按试剂盒说明书进行操作。

1.4 HCV-RNA的检测

采用实时荧光定量PCR 法检测HCV-RNA 含量，仪器为罗氏480PCR 仪，试剂由上海科华生物工程股份有限公司提供，操作按试剂说明书严格进行。HCV-RNA含量＜500拷贝/mL时判断为阴性。

1.5 ALB和ALT的检测

采用日立7170 型全自动生化分析仪检测ALB和ALT 水平，试剂由中生北控生物科技股份有限公司提供，操作按试剂说明书严格进行。ALB 参考范围为40～55 g/L，ALT参考范围为＜50 U/L。

1.6 统计学分析

采用SPSS19.0统计软件处理数据。计数资料采用χ2检验，计量数据以表示，对ALB 采用相关分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HCV-RNA与丙肝抗体检测结果

77 例患者中，丙肝抗体阳性56 例，阴性21 例；HCV-RNA 阳性71 例，阴性6 例；2 种检测方法结果差异有统计学意义（χ2=10.519，P＜0.05）。

2.2 不同HCV-RNA 拷贝数组别与ALB 浓度的变化情况

将45例HCV-RNA阳性的标本按拷贝数不同分成6 组，检测各组ALB 的变化。前4 组随着HCVRNA拷贝数的增加，ALB含量依次降低（表1）。

表1 不同HCV-RNA拷贝数组别与ALB浓度的变化（）

表1 不同HCV-RNA拷贝数组别与ALB浓度的变化（）

2.3 HCV-RNA含量阳性与ALT的关系

从表2 可以看出，在57 例HCV-RNA 阳性的标本中，有22例ALT水平异常，并且随着HCV-RNA拷贝数的增加，ALT 的异常率及平均值也在上升。经相关性分析，ALT 平均值与HCV-RNA 拷贝数呈正相关（r=0.999，P=0.032）。

表2 阳性标本血清HCV-RNA拷贝数与ALT的关系

3 讨论

丙型肝炎病毒是单链正股RNA病毒，通过血液进行传播[4]。丙肝发病过程中肝炎病毒感染使机体免疫系统活化，这些活化的细胞可与因肝炎病毒感染而改变的肝细胞膜成分发生免疫应答，从而造成肝功能的改变和肝细胞的坏死。

丙肝感染初期一般都是急性丙肝期，这个时期是治疗丙肝的最佳时期，但是不会有明显的临床症状；之后会发展为慢性丙肝，慢性丙肝危害大，容易发展为肝硬化、肝癌[3]。目前检测HCV 主要依赖对HCV抗体的检测，感染HCV后，丙肝抗体出现较慢，一般情况下，抗体的血清学转换可以延迟到暴露后几个月才发生，此时可发生丙肝抗体的假阴性，即窗口期。丙肝的窗口期一般为3～6 个月，因此第一次丙肝抗体检查为阴性时，并不能说明没有感染HCV，这就为丙肝的早期诊断造成了困难。HCVRNA 是HCV 的核心组成成分，是HCV 复制最直接可靠的指标，可以反映HCV的复制活跃程度。感染HCV 后1～2 周，血清中即可检测到HCV-RNA。实时荧光定量PCR 法检测准确率高，可真实地反映HCV 的复制情况，可以完善因窗口期而漏诊的丙肝抗体检测。该技术大大缩短了检测丙肝的“窗口期”，有助于早期确诊疾病。

从2.1结果可以看出2种检测方法有差异，实时荧光定量PCR 法的敏感性远高于ELISA 法，从而可以防止在感染早期发生漏诊。研究发现有些病例有抗HCV 阳性而HCV-RNA 阴性的情况，可能是由于经过治疗使病毒复制减慢或停止，血清中的HCVRNA 拷贝数低于最低检出值，而丙肝抗体在体内存在时间长，故可出现丙肝抗体阳性而HCV-RNA 阴性的情况；也有可能是因HCV-RNA十分脆弱，易被血细胞含有的RNA 酶降解，并且HCV-RNA 易受进食的影响，易与迅速增多的血中脂肪及脂蛋白结合，从而降低检出率，出现假阴性。

ALB属于球蛋白，主要存在于人体血浆中，主要由肝实质细胞合成。ALB降低常见于肝硬化合并腹水及其他肝功能严重损害，如急性肝坏死、中毒性肝炎等[8]。肝损伤时ALB 合成、运输和释放发生障碍，引起血清ALB 减少。从表1 数据可看出不同HCVRNA 拷贝数组别与ALB 浓度的变化有相关性，前4组ALB浓度随着HCV-RNA拷贝数的增高而逐步下降，而后2 组ALB 浓度随着HCV-RNA 拷贝数的增高反而上升,这也与近年来一些研究相符合，部分患者血清HCV-RNA 含量高，但肝脏组织仅呈轻度或中度损伤，即HCV-RNA阳性而ALB水平正常。

ALT 主要存在于肝细胞浆内，ALT 明显升高见于急性病毒性肝炎、肝炎病变发展为肝硬化与肝癌并处于活动期时[9-12]，被世界卫生组织推荐为肝脏功能损伤最敏感的检测指标。在本研究中，我们对HCV-RNA 阳性病例的ALT 水平进行了比较，57 例HCV-RNA 阳性病例中有22 例ALT 异常，异常率为38.6%。ALT异常率越高，说明肝脏受到的破坏越严重。表2 结果显示HCV-RNA 拷贝数与ALT 水平呈正相关，说明HCV-RNA是在肝细胞中复制，对细胞产生直接或间接的损害。同时，HCV-RNA 的含量越高，ALT水平越高，说明肝脏受到损伤的程度可能越严重，必须尽快进行抗HCV治疗。

综上所述，HCV-RNA检测是反映HCV感染、活动和复制程度的可靠指标，联合检测丙肝抗体、ALB和ALT，有利于早期诊断，可以更好地为临床服务。

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