刘 华 魏爱淳 秦广珍 陈清清 包海林 周永进

1.江苏省海安县中医院骨伤科，江苏海安 226600；2.江苏省海安县中医院检验科，江苏海安 226600

双合汤对酒精性股骨头坏死兔血液流变学及血栓素A2、前列环素的影响

刘 华1魏爱淳1秦广珍1陈清清1包海林2周永进1

1.江苏省海安县中医院骨伤科，江苏海安 226600；2.江苏省海安县中医院检验科，江苏海安 226600

目的研究双合汤对酒精性股骨头坏死（AOFH）兔的血液流变学及血栓素A2（TXA2）、前列环素（PGI2）的影响。 方法将60只中国白兔随机分成正常组、模型组、美多巴组以及双合汤低、中、高剂量组。除正常组外，各组给予中国白酒（乙醇含量56%）10 mL/（kg·d）灌胃。在造模的同时，双合汤低、中、高剂量组分别给予双合汤灌胃，每日早晚各1次，每次分别为50、100、150 mL。美多巴组给予美多巴灌胃，每日早晚各1次，每次0.125 g。正常组、模型组均给予生理盐水灌胃，每日早晚各1次，每次100 mL。兔给药8周后，取血测定兔血液流变学指标（全血高切黏度、全血低切黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数、红细胞变形指数、卡松黏度、血沉方程K值、全血高切还原黏度、全血低切还原黏度、刚性指数）、血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1α（6-Keto-PGF1α）。 结果与正常组比较，模型组中血液流变学指标、TXB2均显著升高（P＜0.01），6-Keto-PGF1α显著下降（P＜0.01）。与模型组比较，双合汤低剂量组与美多巴组可降低血液流变学指标、TXB2，升高6-Keto-PGF1α（P＜0.05）；而双合汤中、高剂量组可显著降低血液流变学指标、TXB2，升高6-Keto-PGF1α（P＜0.01）。双合汤低剂量组中血液流变学指标、TXB2及6-Keto-PGF1α的水平与中剂量组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；双合汤低剂量组中血液流变学指标、TXB2及6-Keto-PGF1α的水平与双合汤高剂量组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；而血液流变学指标、TXB2及6-Keto-PGF1α在双合汤中、高剂量组中水平比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。 结论双合汤能有效改善AOFH兔的血液流变学，降低血液黏度，纠正血中TXA2/PGI2失衡,从而防治AOFH。

酒精性股骨头坏死；双合汤；血液流变学；血栓素A2；前列环素

股骨头坏死（osteonecrosisofthefemoralhead，ONFH）是由多种病因引起的股骨头血液循环障碍或骨细胞变性导致的成骨细胞等活性成分死亡及之后的修复，最终股骨头内部结构改变、股骨头塌陷而造成髋关节明显活动障碍[1]，其分为创伤性与非创伤性两种。酒精性股骨头坏死 （alcohol-induced osteonecrosis of the femoral head，AOFH）是导致非创伤性ONFH的最为常见的因素之一，其是由于乙醇过量的摄入而导致的[2]。AOFH的西医治疗主要以行人工髋关节置换术为主，虽然近年来人工关节材料及手术技术发展迅速，但由于AOFH发病患者大多为青壮年，而且人工关节的使用寿命有限，因此日后面临着多次的翻修术[3]。祖国医学对非创伤性ONFH的治疗，以“痰瘀同治”为基本治则，在缓解疼痛、改善功能等方面，取得了较为满意的疗效[4]。“双合汤”出自清代名医沈金鳌所著《杂病源流犀浊》，笔者在临床上将此应用于AOFH多年，受益患者较多。为了探讨双合汤治疗AOFH的作用机制，本试验研究了其对AOFH兔的血液流变学及血栓素A2（TXA2）、前列环素（PGI2）的影响。由于TXA2、PGI2在体内欠稳定，难以直接检测，本研究采用测定血浆中TXA2与PGI2稳定代谢产物即血栓素B2（TXB2）与6-酮-前列腺素F1α（6-Keto-PGF1α）来作为判断TXA2与PGI2浓度的指标。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康成年中国白兔60只，平均体重（2.5±0.3）kg，雌雄各半，由南通大学实验动物中心提供，许可证编号：SYXK（苏）2012-0031。

1.2 药品与试剂

双合汤处方组成：桃仁6 g、当归9 g、白芍9 g、川芎9 g、红花6 g、陈皮9 g、半夏9 g、茯苓9 g、白芥子9 g、生地黄9 g、生姜6 g、甘草6 g、竹沥30 g，将上药加水浸没180 min后煎煮2次，第1次加8倍的水煎煮90 min，滤取煎液，药渣加6倍量的水煎煮60 min，2次煎液合并，减压浓缩至每毫升药液相当于1～2 g生药，备用。阳性对照药：美多巴（上海罗氏制药有限公司，0.25 g/片，国药准字：H10930198）。中国白酒（北京红星股份有限公司，乙醇含量56%）。TXB2（批号E1405）、6-Keto-PGF1α（批号E0683）由武汉中美科技有限公司提供。总胆固醇（TC）试剂盒（批号14063）、三酰甘油（TG）试剂盒（批号14218）由上海奥斯生物试剂公司提供。

1.3 仪器与设备

TDL80-2B台式离心机（上海安亭科学仪器有限公司）；γ放射免疫计数器（科大创新股份有限公司）；LBY-N6型全自动血液流变仪（北京普利生仪器有限公司）；AU400型全自动生化分析仪（日本OLYMPUS公司）。

1.4 方法

1.4.1 动物分组 按随机数字表法，将中国白兔分成6组，即正常组、模型组、美多巴组、双合汤低剂量组、双合汤中剂量组、双合汤高剂量组，每组10只。

1.4.2 AOFH造模及给药 参照刘忠堂等[5]的方法进行造模，每组兔均在同样条件下单独分笼饲养，标准自由饮食，饲养1周，使其适应环境后开始实验，采用灌胃法，除正常组外其余各组均给予同种中国白酒10 mL/（kg·d）剂量灌胃。在采用以上剂量白酒灌胃的同时，双合汤低、中、高剂量组分别给予双合汤灌胃，每日早晚各1次，每次分别为50、100、150 mL；美多巴组给予美多巴灌胃，每日早晚各1次，每次0.125 g；正常组、模型组均给予生理盐水灌胃，每日早晚各1次，每次100 mL。

1.5 观察指标及其测定方法

兔给药8周后，均于禁食12 h后，在兔耳中心静脉取血10 mL，分装入3支真空采血管，1号管4 mL以肝素抗凝后，全自动血液流变仪测定血液流变学指标，即全血高切黏度（200/s）、全血低切黏度（3/s）、血浆黏度（ηp）、红细胞聚集指数（Arbe）、红细胞变形指数（TK）、卡松黏度（ηc）、血沉方程K值（K）、全血高切还原黏度（HRV）、全血低切还原黏度（LRV）、刚性指数（IR）；2号管3 mL，以3500 r/min离心20 min，吸弃上清液后，由γ放射免疫计数器测定血浆TXB2与6-Keto-PGF1α；3号管3 mL，全自动生化分析仪测定TC、TG，以上操作均严格按照试剂盒内说明书进行。

1.6 统计学方法

采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差（）表示，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血液流变学指标的比较

模型组中 200/s、3/s、ηp、ηc、K、Arbe、TK、HRV、LRV、IR均显著高于正常组 （P＜0.01）。与模型组比较，双合汤低剂量组与美多巴组可降低200/s、3/s、ηp、ηc、K、Arbe、TK、HRV、LRV、IR（P＜0.05）。与模型组比较，双合汤中、高剂量组可显著降低200/s、3/s、ηp、ηc、K、Arbe、TK、HRV、LRV、IR（P＜0.01）。双合汤中、高剂量组中200/s、3/s、ηp、ηc、K、Arbe、TK、HRV、LRV、IR与正常组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 各组血液流变学指标的比较（，n=10）

表1 各组血液流变学指标的比较（，n=10）

注：与正常组比较，●P＜0.01；与模型组比较，▲P＜0.05，■P＜0.01；200/s：全血高切黏度；3/s：全血低切黏度；ηp：血浆黏度；Arbe：红细胞聚集指数；TK：红细胞变形指数；ηc：卡松黏度；K：血沉方程K值；HRV：全血高切还原黏度；LRV：全血低切还原黏度；IR：刚性指数

组别 200/s（mPa.s） 3/s（mPa.s） ηp（mPa.s） ηc（mPa.s） K Arbe TK HRV LRV IR正常组模型组美多巴组双合汤低剂量组双合汤中剂量组双合汤高剂量组2.23±0.27 4.08±0.39●3.17±0.32▲3.11±0.31▲2.31±0.28■2.32±0.29■8.86±1.09 14.88±1.63●11.16±1.33▲11.12±1.32▲8.91±1.11■8.89±1.10■1.48±0.31 2.91±0.25●2.04±0.27▲2.06±0.28▲1.53±0.33■1.51±0.32■2.43±0.21 3.97±0.32●3.18±0.27▲3.13±0.26▲2.40±0.20■2.44±0.22■29.76±9.38 56.93±16.42●40.49±12.78▲41.37±12.91▲30.89±9.67■31.07±9.99■3.84±0.42 7.06±0.51●5.68±0.46▲5.71±0.47▲3.91±0.43■3.93±0.43■0.76±0.08 1.47±0.17●1.09±0.12▲1.11±0.13▲0.79±0.09■0.81±0.10■3.04±0.31 5.58±0.44●4.17±0.39▲4.14±0.38▲3.10±0.33■3.07±0.32■9.69±1.27 17.53±1.71●12.74±1.49▲12.79±1.51▲9.78±1.29■9.79±1.29■3.04±0.39 5.98±0.65●4.29±0.48▲4.32±0.50▲3.06±0.40■3.07±0.41■

2.2 各组TXB2、6-Keto-PGF1α、TC、TG的比较

模型组中TXB2、TC、TG均显著高于正常组（P＜0.01）；模型组中6-Keto-PGF1α显著低于正常组（P＜0.01）。与模型组比较，双合汤低剂量组与美多巴组可降低TXB2、TC、TG，升高6-Keto-PGF1α（P＜0.05）。与模型组比较，双合汤中、高剂量组可显著降低TXB2、TC、TG，升高6-Keto-PGF1α（P＜0.01）。双合汤中、高剂量组TXB2、TC、TG、6-Keto-PGF1α与正常组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

3 讨论

长期酗酒已成为导致ONFH的最为常见的因素之一，酒精中毒是AOFH的一个确定病因[6]，但AOFH确切的发病机制尚未得到完全阐明[7]，近年来，国内外的学者从多方面对其进行了研究，提出了多种学说，如脂质代谢紊乱与酒精的细胞毒作用学说、骨髓基质细胞（MSCs）成脂分化学说、脂肪栓塞与局部血管内凝血（IC）学说、骨细胞脂肪变性等学说[8-10]。本研究结果显示，模型组中TC、TG均显著高于正常组，此结果与Okazaki等[9]研究的结果一致，说明AOFH中存在脂代谢紊乱。陈跃平等[10]认为酒精的毒副作用通过影响肝细胞线粒体的结构与功能，而引起脂质分解代谢功能降低，同时，酒精可刺激脂质的合成，最终形成高脂血症，当循环中脂肪物质增多，聚集成脂肪球，血液黏稠度增高，血流淤滞，栓塞于股骨头内微血管，最终形成AOFH。本研究结果显示，模型组中血液流变学指标均显著高于正常组，此结果与Suh等[11]研究的结果相似，说明AOFH中存在血液流变学异常。梁笃等[12]认为酒精能导致脂肪细胞在血管内积聚而引起脂质代谢紊乱与血液流变学异常，出现高脂血症与血液高凝状态，引起骨内微循环障碍，触发IC机制，最终导致AOFH的发生。

表2 各组TXB2、6-Keto-PGF1α、TC、TG的比较（，n=10）

表2 各组TXB2、6-Keto-PGF1α、TC、TG的比较（，n=10）

注：与正常组比较，●P＜0.01；与模型组比较，▲P＜0.05，■P＜0.01；TXB2：血栓素B2；6-Keto-PGF1α：6-酮-前列腺素F1α；TC：总胆固醇；TG：三酰甘油

组别 TXB2（pg/mL）6-Keto-PGF1α（pg/mL）TC（mmol/L）TG（mmol/L）正常组模型组美多巴组双合汤低剂量组双合汤中剂量组双合汤高剂量组131.6±30.7 305.4±69.5●183.8±41.6▲186.2±42.7▲134.1±31.9■135.3±32.1■223.7±48.4 117.5±27.3●168.4±36.9▲165.9±35.3▲218.6±46.9■225.8±48.8■1.26±0.33 2.63±0.51●1.98±0.35▲2.01±0.39▲1.28±0.36■1.25±0.34■1.03±0.25 2.27±0.36●1.56±0.35▲1.53±0.33▲1.01±0.24■1.05±0.26■

黄立新等[13]应用美多巴治疗早期AOFH患者，通过随访27.8个月，患者临床症状、X线与MRI表现均有明显改善。吕智等[14]的动物试验研究结果显示美多巴的主要成分即左旋多巴能使血浆内生长激素明显升高，从而促进坏死股骨头内的新骨形成，由此增强坏死股骨头的力学性能。因此本研究选用美多巴作为对照药进行研究。ONFH属中医学中“骨痹”“痰浊”“骨蚀”范畴。在临床中，笔者将ONFH的患者辨证分为3型，即气滞血瘀型、痰瘀痹阻型、肝肾亏虚型。笔者把AOFH归属于痰瘀痹阻型，嗜酒无度损伤脾胃，导致脾失健运，肝失疏泄，湿热内蕴，痰浊郁结，瘀血阻滞。刘道兵等[4]经过多年的研究提出了“脾虚生痰，由痰致瘀，因瘀致痹”的非创伤性ONFH的病机学说以及健脾化痰与活血通络的“痰瘀同治”的基本原则。在临床上，对于AOFH，笔者使用双合汤加减治疗。“双合汤”出自清代名医沈金鳌所著《杂病源流犀浊》，此方有活血化瘀、祛痰通络的作用，适用于痰瘀痹阻筋脉、关节重着疼痛者；此方中桃仁、红花、当归、川芎活血化瘀、通络止痛，半夏、茯苓、白芥子、鲜竹沥、陈皮祛痰，白芍酸敛肝阴，生地黄养肝阴而泄伏热，生姜汁、甘草温中健脾、调和诸药。全方共奏活血化瘀、祛痰通络之功。本研究发现，与模型组比较，双合汤中、高剂量组可显著降低血液流变学指标、TC、TG，说明双合汤能有效改善AOFH兔的血液流变学，降低血液黏度。

TXA2与PGI2是两种生物学活性很强的花生四烯酸代谢产物。TXA2主要在血小板微粒体中合成与释放，其有很强的血小板聚集作用，能导致血小板聚集形成血栓。PGI2主要在血管内皮细胞（VEC）中合成，其有强烈的扩张血管的作用；PGI2为目前发现的最强的血小板聚集抑制剂，其不仅能预防血栓的形成，甚至可以消除已存在的血小板聚集[15]。TXA2/PGI2的平衡对血小板黏附聚集、血管张力及血栓形成具有重要调节作用，当VEC功能受损时，TXA2释放增多和/或PGI2合成减少，TXA2/PGI2失衡，使得血小板与纤溶系统等功能紊乱，产生IC，导致股骨头微循环障碍[16]。本研究结果显示，模型组中TXB2显著高于正常组而6-Keto-PGF1α显著低于正常组，提示AOFH存在TXA2/PGI2的失衡；与模型组比较，双合汤中、高剂量组可显著降低TXB2，升高6-Keto-PGF1α，提示双合汤能缓解酒精引起的VEC损害，恢复TXA2/PGI2的平衡，抑制IC，从而改变病变股骨头的缺血。

其实双合汤是以桃红四物汤与二陈汤组建，并配以竹沥与白芥子祛痰而组成，共奏祛痰、活血化瘀、通络止痛之功。中医内科学用其治疗痰瘀痹阻之痹证[17]。桃红四物汤出自清代名医吴谦所著的《医宗金鉴》，为经典的活血化瘀方剂；而二陈汤出自宋代《太平惠民和剂局方》，其为燥湿化痰的经典方剂。现代药理研究表明，桃红四物汤具有促进骨髓基质细胞增殖、抑制其成脂分化、促进其成骨分化的作用[18]；二陈汤能有效调节脂质代谢紊乱[19]；李润生等[20]研究表明桃红四物汤具有保护VEC与改善VEC的分泌功能、改善血液流变学而降低血脂的作用。

从本研究结果来看，AOFH既有血脂紊乱的痰浊证的表现，又有IC的血瘀证的表现，这就体现了“痰可夹瘀”与“痰可致瘀”的病理表现，更验证了“痰瘀同病”、“痰瘀互结”的理论，也是以“痰瘀同治”为基本原则而进行干预治疗的依据。总之，通过本研究，笔者认为双合汤可能通过改善体内血液流变学、降低血液黏度、修复受损的VEC、恢复TXA2/PGI2的平衡从而改善病变股骨头的微循环来防治AOFH，由此为临床治疗AOFH提供了科学依据。

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Effect of Shuanghe Decoction on hemorheology,thromboxane A2and prostacyclin of alcohol-induced osteonecrosis of the femoral head in rabbits

LIU Hua1WEI Aichun1QIN Guangzhen1CHEN Qingqing1BAO Hailin2ZHOU Yongjin1

1.Department of Orthopedics,Hai'an Hospital of Traditional Chinese Medicine,Jiangsu Province,Hai'an 226600, China;2.Department of Clinical Laboratory,Hai'an Hospital of Traditional Chinese Medicine,Jiangsu Province,Hai'an 226600,China

Objective To study the effect of Shuanghe Decoction on hemorheology,thromboxane A2(TXA2)and prostacyclin (PGI2)of alcohol-induced osteonecrosis of the femoral head (AOFH)in Chinese white rabbits.Methods Sixty Chinese white rabbits were randomly divided into normal group,model group,Madopar group and the low,medium, high-dose of Shuanghe Decoction group.Except the normal group,each group was lavaged with Chinese spirit(alcohol content 56%)10 mL/(kg·d).Meanwhile,the low,medium and high-dose group were all lavaged with Shuanghe Decoction and the rabbits of them took Shuanghe Decoction two times a day with 50,100,150 mL each time.The Madopar group was lavaged with Madopar,and the rabbits took Madopar two times a day with 0.125 g.The normal group and the model group were given with physiological saline,and the rabbits of them took physiological saline two times a day, with 100 mL each time.After 8 weeks,rabbits were sacrificed to collect blood for determination of the indexes of hemorheology (high blood viscosity,low blood viscosity, plasma viscosity,red cell aggregation index,erythrocyte deformation index,ηc,K value of blood sedimentation equation,high blood reduced viscosity,low blood reduced viscosity,rigidity index),thromboxane B2(TXB2)and 6-keto-PGF1α(6-Keto-PGF1α).Results Compared with the normal group,the indexes of hemorheology and TXB2in the model group were significantly increased (P＜0.01),and 6-Keto-PGF1αin the model group were significantly decreased(P＜0.01).Compared with the model group,the indexes of hemorheology and TXB2were decreased in the lowdose of Shuanghe Decoction group and the Madopar group,and 6-Keto-PGF1αwere increased (P＜0.05).Compared with the model group,the indexes of hemorheology and TXB2were significantly decreased in the medium and high-dose of Shuanghe Decoction group,and 6-Keto-PGF1αwere significantly increased (P＜0.01).The differences of the levels of hemorheology,TXB2and 6-Keto-PGF1αbetween the low and medium-dose of Shuanghe Decoction group were statistically significant(P＜0.05).The differences of the levels of hemorheology,TXB2and 6-Keto-PGF1αbetween the low and high-dose of Shuanghe Decoction group were statistically significant(P＜0.05).There were no significant differences in the levels of hemorheology,TXB2and 6-Keto-PGF1αbetween the medium and high-dose of Shuanghe Decoction group (P＞0.05).Conclusion Shuanghe Decoction can effectively improve hemorheology,reduce blood viscosity and correct TXA2/PGI2imbalance in blood of rabbits with AOFH,so as to prevent and cure AOFH.

Alcohol-induced osteonecrosis of the femoral head;Shuanghe Decoction;Hemorheology;Thromboxane A2; Prostacyclin

R681.8

A

1673-7210(2015)11(b)-0025-05

2015-05-19本文编辑：张瑜杰）

江苏省南通市市级科技计划项目（HS13933）。

刘华（1979-），男，硕士；研究方向：创伤骨科、关节外科的基础与临床研究。

魏爱淳（1967-），男，教授，主任中医师；研究方向：骨病、腰腿痛的基础与临床研究。