葛永斌，燕傲蕾，徐 娟，程孝中

（亳州师范高等专科学校，安徽 亳州236800）

药用菊花为菊科植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat）的干燥头状花序，是我国传统中药材，始载于《神农本草经》。中华人民共和国药典（一部）2010年版，收载贡菊、滁菊、亳菊和杭菊4 种，被称为中国的四大药用菊花[1]。菊花主要含有黄酮类、酚酸类、挥发油类、氨基酸和糖类等活性物质[2]。因药用菊花的品种不同和产地影响，其化学成分及含量也有差异。本文测定4 种药用菊花中总黄酮、总酚、总糖含量，探讨遗传因素和生态因子对菊花药效成分的影响，为4 种药用菊花的质量评价和遗传多样性研究提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备

TU-1950 型紫外可见分光光度计； 安捷伦1200SL 高效液相色谱；ShimazuiQP2010s 气质联用仪；R-205 旋转蒸发仪；SHZ-D （Ⅲ） 循环水式真空泵；DZF-200 型 真 空 干 燥 箱；Shim-pack VP-ODS色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）等。

1.2 材料与试剂

本试验所用贡菊、滁菊、亳菊和杭白菊于2013年11月采集于黄山、滁州、亳州和浙江桐乡。芦丁、焦性没食子酸、槲皮素、绿原酸、木犀草苷购自中国药品生物制品鉴定所，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素、金合欢素、芹菜素对照品购自北京元宝山色谱科技有限公司。

1.3 样品的测定

总黄酮、总糖和总酚含量的测定参照文献3 进行[9]，挥发油的测定参照文献4 进行[4]，黄酮类成分、绿原酸和3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量的测定方法参照文献5 进行[5]，游离糖和游离氨基酸含量的测定参照文献6 进行[6]。

2 结果与分析

2.1 黄酮类含量的测定

2.1.1 总黄酮含量测定结果

比色法测定4 大药用菊花总黄酮含量结果见表1，其中4 种菊花总黄酮的含量依次为：贡菊＞滁菊＞亳菊＞杭白菊。

表1 4 种药用总黄酮、总糖、挥发油总量和总酚测定结果（干重/%）

表2 7 种黄酮类成分、绿原酸和3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸测定结果（干重/%）

2.1.2 7 种黄酮类成分、绿原酸和3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸测定结果

测定结果见表2，4 种菊花的上述9 种成分含量各有高低。

2.2 糖类含量的测定

2.2.1 总糖含量的测定

以葡萄糖标准液作对照，葡萄糖最大吸收峰波长为490nm，在10-50μg/mL 浓度范围内总糖的含量与490nm 下的吸收值呈良好线性关系，测定结果见表1，总糖含量依次为：亳菊＞滁菊＞杭白菊＞贡菊。

2.2.2 游离糖含量的测定

本实验检测出果糖和葡萄糖，未检出蔗糖和麦芽糖。各菊花样品中游离糖类含量结果见表3。果糖的含量依次为：亳菊＞杭白菊＞滁菊＞贡菊；葡萄糖的含量依次为：亳菊＞滁菊＞杭白菊＞贡菊。

表3 4 大药用菊花中游离糖含量（%）

2.3 挥发油的测定

2.3.1 挥发油总量的测定

测定结果见表1，4 种菊花挥发油总量的含量依次为：滁菊＞亳菊＞贡菊＞杭白菊； 4 种药用菊花挥发油的颜色不同，贡菊为浅黄色、滁菊为黄色、亳菊浅蓝色、杭白菊为浅绿色。

2.3.2 挥发油成分分析结果

对4 种菊花挥发油成分进行GC-MS 分离，共鉴定出的化合物有67 种，其中杭菊有7 种、贡菊有19 种、亳菊有30 种、滁菊有43 种。

2.4 总酚含量的测定结果

以没食子酸标准液作对照，没食子酸最大吸收峰波长为760nm，在4-20μg/mL 浓度范围内总酚的含量与760nm 下的吸收值呈良好线性关系，测定结果见表1，总酚的含量依次为：亳菊＞滁菊＞杭白菊＞贡菊。

2.5 游离氨基酸含量测定结果

4 种菊花中共检测出20 种氨基酸，其中滁菊和亳菊检测出18 种，贡菊和杭白菊检测出19 种（见表4）。各种游离氨基酸中天门冬酰胺、谷氨酰胺，丙氨酸、精氨酸以及脯氨酸在菊花中的含量比较高，但对各种药菊来说也存有差异。

表4 4 种药用菊花中游离氨基酸的含量（%）

3 讨 论

3.1 4 种菊花活性成分差异与生态因子

黄山市地处东经117°02′-118°55′和北纬29°24′-30°24’之间，属亚热带季风湿润气候区，年平均气温15.5-16.4゜C，降水量在1395-1702 毫米之间。中低山地大部分为黄壤，山地为黄棕壤，丘陵地带多为红壤和紫色土，质地粘重，酸性。滁州地处长江下游北岸，位于北纬31°51′-33°13′、东经117°09′-119°13′之间，地貌大致可分为丘陵区、岗地区和平原区三大类型，海拔399.2 米，气候为北亚热带湿润季风气候，全年平均气温15.4℃，年平均降水量1035.5 毫米，年日照总时数2073.4 小时，年无霜期210 天，土壤多为黄褐土。亳州位于东经115°53′-116°49′、北纬32°51′-35°05′,海拔22-42.5 米,地形为岗、坡、碟形洼地相间分布的平原地貌特征，气候属于暖温带半湿润气候，年平均气温14.9℃，平均日照2184 小时，年均降水量831 毫米,平均无霜期213 天,土壤为潮土与砂姜黑土。浙江桐乡市地处北纬30°28′-30°47′、东经120°17′-120°39′,平均海拔5.3 米，气候属典型的亚热带季风气候，年平均气温16.5℃,年无霜期243.6 天,土壤为江、海、湖沼沉积物。

生物的存在和繁殖依赖于各种生态因子的综合作用，每种植物对温度、光照、水分等均有一个耐受范围，因此每个生态因子的改变都可能影响植物的分布，但是在一定空间分布区域内，不同的生态因子产生的效应也是有差异的，在不同方向分布边缘影响生长和发育生态因子是多种多样的，最终决定物种分布或产量，说明产地的环境因素对药用菊花的成分具有较大影响，对植物的次生代谢影响显著，从而影响药材的质量[7]。相关的研究结果[3，4，8，9]显示，不同种、不同种源的药用菊花总黄酮、总糖、挥发油总量和总三萜含量存在较明显差异。本研究结果表明，4 大药用菊花成分存在一定的差异,进一步证明贡菊、滁菊、亳菊和杭菊的生境不同对其化学成分及含量有较大的影响。

3.2 4 种菊花活性成分差异与遗传异质

王桃银等[10]对贡菊、滁菊、毫菊、杭白菊核型研究发现4 种药用菊花都是六倍体，但形态各异，在相对长度、核型不对称系数和着丝粒位置方面都存在差异。贡菊2n=54=(36-42)m(0-2SAT)+(10-14)sm+(2-4)st；滁菊2n=54=42m(8SAT)+12sm；亳菊2n=54=(38-42)m(0-2SAT)+8-10)sm(0-2SAT)+(2-4)st；杭菊2n=52-54=(30-44)m(0-4SAT)+(10-16)sm(0-4SAT)+(1-6)st。贡菊的染色体数目为32-39 和49-54，滁菊的染色体数目为50-55，亳菊的染色体数目为49-55，杭菊的染色体数目为43-55。经过自然和人工选择，贡菊、滁菊、毫菊和杭菊形成了固定的产地，表现出不同的药用特性，4 种药菊遗传异质是影响药菊品质的遗传因素。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京:中国医药科技出版社，2010:292.

[2]张晓媛，段立华,赵丁.菊花化学成分及药理作用的研究[J].时珍国医国药，2008，19(7):1702-1704.

[3]杨毕超，时维静，章庆华，等.安徽省药用菊花多类成分含量比较[J].安徽科技学院学报，2013，27(5)：50-54.

[4]段崇霞，张正竹.四大药用菊花功能成分的比较研究[J].安徽农业大学学报，2008，35(1):99-105.

[5]于艳，时维静，邓家胜，等.菊花中7 种化合物HPLC 检测方法的建立[J].安徽科技学院学报，2012，26(5):43-48.

[6]高学玲，贺曼曼，邹敏亮，等.不同品种药用菊花中游离糖类及游离氨基酸含量的HPLC 分析[J].天然产物研究与开发，2012，24:639-643.

[7]孟祥才，陈士林，王喜军.论道地药材及栽培产地变迁[J].中国中药杂志，2011，36(13):1687-1692.

[8]李冬玲.不同来源药用菊花挥发油和总黄酮含量的比较分析[J].安徽农业科学，2010，38(7):3444-3446.

[9]郝春影，朱思斯，史怡冰,等.不同产地菊花中黄酮类及三萜类成分的含量比较[J].中医药信息，2012，29(1):24-27.

[10]王桃银，郭巧生，汪涛.21 个药用菊花栽培类型的核型分析[J].南京农业大学学报，2012，35(36):13-18.