杨国翠 崔峥 邱高峰

（上海海洋大学 省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室，上海 201306）

中华绒螯蟹性腺特异表达蛋白EsSOX21b-like的原核表达与抗体制备

杨国翠 崔峥 邱高峰

（上海海洋大学 省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室，上海 201306）

Sox（SRY-related HMG-box）基因编码一类重要的转录因子，其产物都具有一个HMG基序保守区。之前我们在中华绒螯蟹分离鉴定了一个只在性腺中特异表达转录本EsSox21b-like，为了验证EsSOX21b-like蛋白是否也在中华绒螯蟹性腺中特异表达，本研究原核表达了EsSOX21b-like蛋白，即将EsSox21b-like基因序列克隆到pGEX-2T表达载体，构建重组表达质粒pGEX-2T-EsSox21b-like，转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导融合表达，经SDS-PAGE分析表明，融合蛋白主要以包涵体形式存在，分子量约为54 kD。利用Ni柱亲和纯化融合蛋白后免疫家兔，制备了多克隆抗体，Western blotting检测表明该抗体能特异地识别性腺组织中EsSOX21b-like蛋白，而在其他组织未检测到其表达，目的蛋白分子量约为28 kD，在精巢组织中的表达量比在卵巢中高，该结果暗示EsSOX21b-like可能在性腺发育过程中起重要调控作用。

中华绒螯蟹；EsSOX21b-like蛋白；原核表达；抗体制备

Sox（SRY-related HMG-box）基因是一类SRY（sex-determining region of Y chromosome）相关基因，编码一系列转录因子，参与性别决定与分化、骨组织发育、血细胞生成、神经系统发育、晶状体发育等多种早期胚胎发育过程［1］。SRY基因是哺乳动物雄性性别决定基因，对睾丸的发育有着决定性的影响，它首先在人类Y染色体上发现，是Sox基因家族的第一个成员［2］。其产物含有一个HMG盒［3］，能够与DNA特异性结合，调控其转录。之后研究发现了许多与SRY相关的Sox基因，Sox3、Sox5、Sox6、Sox8、Sox9、Sox17等都是参与性别分化的重要基因。……