王丽琴　韩燕雁

（贵州省晴隆县农业局动物疫病预防控制中心，贵州晴隆　561400）

羊布鲁氏菌病的实验室常用检测方法的比较

王丽琴韩燕雁

（贵州省晴隆县农业局动物疫病预防控制中心，贵州晴隆561400）

目的比较两种检测方法检测布鲁氏菌病的敏感性和准确性。方法采用虎红平板凝集试验（RBPT）和试管凝集试验（SAT）两种检测方法对动物进行布鲁氏菌病血清学检测。结果两种检测方法对布鲁氏菌病检测没有显著性差异，RBPT的阳性率明显约高于SAT。结论两种方法同时使用可提高布鲁氏菌病的检出率，对治疗和控制布鲁氏菌病起到积极作用。结果表明：两种试验的符合率在90%以上。布鲁氏病影响从事畜牧业生产、经营、加工、运输等人群的身体健康，也对畜牧业健康发展危害极大。主要是对阳性动物进行淘汰、净化，为了减少该病的发生。对非疫区、自繁自养，确需要从外地引种，要隔离2个月，经检疫确认健康者才能混群。对疫区进行定期多次检疫，隔离并逐步淘汰阳性家畜，培育健康畜群，同时做好消毒工作。为了确保畜牧业健康发展必须做好兽医实验室工作。

布鲁氏菌病虎红平板试验（RBPT） 试管凝集试验（SAT） 比较

布鲁氏菌病是一种布鲁氏菌引起的急性或慢性的人畜共患病。动物感染了布鲁氏菌病后，一般不表现明显的临床症状，病程发展缓慢。其主要表现为：怀孕母畜常流产，但并非必然现象，流产后伴随有胎衣滞留、胎儿死亡、化脓性子宫炎。有的关节炎、乳腺炎等。公畜主要表现为睾丸炎或附睾炎。人感染布氏杆菌后，病菌在人体中产生菌血症和毒血症，累及各个器官，慢性期多侵及脊柱和大关节。运动系统除侵及脊柱外还可侵及骶髂、髋、膝、肩关节。影响从事畜牧业生产、经营、加工、运输等人群的身体健康，也对畜牧业健康发展危害极大。主要是对阳性动物进行淘汰、净化，为了减少该病的发生。对非疫区、自繁自养，确需要从外地引种，要隔离2个月，经检疫确认健康者才能混群。对疫区进行定期多次检疫，隔离并逐步淘汰阳性家畜，培育健康畜群，同时做好消毒工作。为了确保畜牧业健康发展必须做好兽医实验室工作。

1　材料与方法

1.1材料

待检样品采集于不同的3个养羊场，分3个批次，共计 2 391份。待检样品于-20 ℃放存。

1.2检测试剂

虎红平板凝集试验抗原及阳性血清由青岛易邦生物工程有限公司提供，批准文号：兽药生字（2011）150138017；试管凝集试验的抗原及阳性血清由青岛易邦生物工程有限公司提供，批准文号（2011）150138011。

1.3试验方法

1.3.1血清采集及血清制备 将羊保定采颈静脉血，血样采好后，用标记笔在一次性采血器上注明对应的羊耳标号，除去针头，整齐的放置在保温箱内，及时的送回实验室离心后取上清液进行检测。检测后的血清于-20 ℃的冰箱内保存备份。

1.3.2虎红平板凝集试验（RBPT） 本试验操作标准按中华人民共和国国家标准（GB/T 18646—2002）进行，用标记笔在灭菌干净的玻璃板上编上号，用移液器吸取30μl虎红平板凝集抗原30μl，在分别吸取对应血清30μl与虎红平板凝集抗原混匀。同时以阴阳性血清作对照。在室温下（20 ℃）4～10 min内记录反应结果。被检血清出现颗粒或絮状的凝集现象均为阳性，完全不凝集的判为阴性，无可凝反应。

1.3.3试管凝集试验（SAT） 本试验按操作标准按中华人民共和国国家标准（GB/T 18646—2002）进行，将标记好的试管，第1管标记编号后加1.15 ml稀释液；第2～4管各加入0.5 ml稀释液；然后用液移器在第1管中加入被检血清0.1 ml，再用液移器连续吹打5～6次混匀。吸取0.25 ml混合液弃去。再吸取0.5 ml混匀液加入第2管，如前述方法混匀。再吸第3管混匀液0.5 ml到第3管，如此倍比稀释到第4管，从第4管弃去混匀液0.5 ml。稀释度从第1管到第4管分别是1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100。再将0.5 ml 20倍稀释的抗原加入已稀释好的各试管中，并振摇均匀，血清稀释度为1∶25、1∶50、1∶100、1∶200。同时做阴、阳、抗原对照并配制比浊管振摇均匀。最后将全部试管置37℃温箱中24h，取出检查并记录结果。以比浊管为标准判断结果。按各试管上层液体清亮度判读：

（1）++++菌体完全凝集，100%下沉，上层液体100%清亮；

（2）+++菌体几乎完全凝集，上层液体100%清亮；

（3）++菌体凝集显著，液体50%清亮；

（4）+凝集物有沉淀，液体25%清亮；

（5）-凝集物无沉淀，液体均匀混浊。

2　结果

通过用虎红平板凝集试验对2391份羊血清进行检测，其中第1批503份血清用虎红平板凝集试验检出23份阳性（阳性率为4.57%），用试管凝集试验检出20份阳性（阳性率为3.98%）；第2批次739份血清用虎红平板凝集试验检出130份阳性（阳性率为18%），用试管凝集试验检出126份阳性（阳性率为17.1%）；第3批次1 149份用虎红平板凝集试验检出153份阳性（阳性率为13.3%），用试管凝集试验检出148份阳性（阳性率为12.8%），详见表1。与试管凝集试验的敏感性、特异性和符合率分别是100%，98.06%，96.08%，详见表2。

表1　虎红平板凝集试验与试管凝集试验检测羊血清结果对照表

表2　虎红平板凝集试验和试管凝集试验的结果比较

3　讨论

从试验结果来看，用RBPT检测羊布鲁氏菌病，2391只羊中共检测出阳性306只，阳性率为12%，而用SAT检出阳性为294只，阳性率为11.3%，说明用RBPT检测存在假阳性。与SAT相比，RBPT的敏感性为100%、特异性为98.06、符合率为96.08%，说明RBPT用于样品的初筛。因方法操作简单、使用时间短、成本低。所以该方法仍可以用于不鲁氏菌的大面积监测及流行病学调查。而SAT特异性高，检测准确，但操作麻烦，费时、费力、不适于作大面积的筛选检测。在实验室操作中把两种方法结合起来用，互补优劣。而SAT既可以定性，也可以定量，因而在判定反应强度上比RBPT更精确。

［1］ 樊三忠，刘金虎，陈冬毅，等.虎红平板试验与试管凝集试验检测奶牛布鲁菌病的比较［J］.中国动物检疫，2009，26（9）：52-53.