钱芳，刘志辉，陆超

（南京中医药大学附属医院，江苏南京210029）

高效液相色谱法测定黄蜀葵花总黄酮固体分散体中金丝桃苷含量*

钱芳，刘志辉，陆超

（南京中医药大学附属医院，江苏南京210029）

目的建立测定黄蜀葵花总黄酮固体分散体中金丝桃苷含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Hedera C18柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相梯度洗脱，流速为1.0mL/min，检测波长为360 nm，柱温为30℃。结果金丝桃苷的质量浓度在1.140 6～72.998μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好（r=1.000 0），平均加样回收率为99.01%，RSD为1.94%（n=9）。结论该方法简便易行，结果准确，重复性好，可用于测定黄蜀葵花总黄酮固体分散体中金丝桃苷的含量。

黄蜀葵花总黄酮；固体分散体；高效液相色谱法；金丝桃苷

黄蜀葵花为锦葵科秋葵属黄蜀葵Abelmoschus manihot（L.）Medic的干燥花，主要功效为消肿解毒、清利湿热，内服用于治疗水肿淋浊、湿热壅遏，外用治疗水火烫伤、痈疽肿毒［1］。黄酮类化合物为主要活性成分，其中以金丝桃苷、异槲皮苷的含量较高［2-3］。黄蜀葵花黄酮类成分吸收较差［4］，影响疗效。将其制成固体分散体，能较好地提高黄酮类化合物的溶解度，从而提高其生物利用度。本试验中，用高效液相色谱（HPLC）法测定黄蜀葵花总黄酮固体分散体中金丝桃苷的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent1100型高效液相色谱仪（G1322A脱气机，G1311A四元泵，G1316A柱温箱，G1314A VWD检测器，Agilent ChemStation，美国安捷伦公司）；BP-211D型十万分之一电子分析天平（德国赛多利斯公司）；KQ-1000E型超声波清洗器（江苏省昆山市超声仪器有限公司）；101-1A型电热鼓风干燥箱（江苏省南通市沪通制药机械设备有限公司）；HH-4型数显型恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）。金丝桃苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为111521-201205，供含量测定用）；黄蜀葵花总黄酮固体分散体（批号为150511，150512，150514，本实验室制备）；液相色谱用试剂为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［1］

色谱柱：Hedera C18柱（250 mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱，0～35min时（17∶83），35～37min时（30∶70），37～53min时（30∶70），53～55min时（17∶83），55～60min时（17∶83）；检测波长：360 nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。

2.2 溶液制备

取金丝桃苷对照品，精密称定，加甲醇溶解，制成1 mL含20μg的溶液，即得对照品溶液。精密称取样品90 mg，置25mL容量瓶中，加甲醇，超声30min，放冷，再加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取处方比例的辅料，按供试品溶液制备方法制成空白辅料溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验：取2.2项下3种溶液，分别进样10μL。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱峰相应位置上显相应峰，而空白辅料溶液色谱中无此峰，说明辅料对金丝桃苷的含量测定无干扰。金丝桃苷与样品中其他组分色谱峰可达基线分离，理论板数按金丝桃苷峰计在10 000以上，分离度大于2.0。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：取对照品溶液，用甲醇分别稀释至质量浓度为72.998，36.499，18.249 5，9.124 8，4.562 4，2.281 2，1.140 6μg/mL的溶液，由样测定。以进样量（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=22.009X-0.9407，r=1.000 0（n=7）。结果表明，金丝桃苷质量浓度在1.140 6～72.998μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：取同一对照品溶液，精密吸取10μL，注入液相色谱仪，重复测定6次，计算峰面积。结果的RSD为1.20%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12 h时进样测定峰面积。结果的RSD为0.17%（n=6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

重复性试验：取同一批（批号为150511）样品约90mg，共6份，精密称定，依法制备供试品溶液，进样测定，以金丝桃苷含量计算。结果的RSD为1.01%（n=6），表明该方法重复性较好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为150511）约47mg，共9份，精密称定，加入金丝桃苷对照品，依法制备供试品溶液，精密吸取10μL，进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1 金丝桃苷加样回收试验结果（n=9）

2.4 样品含量测定

取3批样品，每批2份，依法制备供试品溶液，进样测定。结果批号为150511，150512，150514的供试品中，金丝桃苷含量分别为2.57，2.46，2.51mg/g。

3 讨论

黄蜀葵花的主要活性成分为黄酮类化合物，其中以金丝桃苷含量较高，故以金丝桃苷为含量测定的指标成分。

参考2010年版《中国药典（一部）》［5］，以乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）为流动相，结果分离效果不佳。文献［6-9］报道的金丝桃苷的含量测定方法，试验中金丝桃苷未能有效分离，且分析时间过长。曾比较乙腈-四氢呋喃-冰醋酸溶液为流动相［10］，四氢呋喃-甲醇-乙腈-冰醋酸溶液为流动相［11］。通过反复摸索，最后以乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱，实现了较好的分离效果。

本试验中采用超声处理提取样品，比较了超声20，30，40min金丝桃苷的提取率，结果30min与40min提取的得率相同，故确定提取时间为30min。

本试验中建立的高效液相色谱法简便易行，结果准确，重复性好，能有效控制黄蜀葵花总黄酮固体分散体中金丝桃苷的含量。

［1］刘爽，江蔚新，吴斌.黄蜀葵花化学成分及药理活性研究进展［J］.中国现代中药，2010，12（8）：5-9.

［2］刘子修，李燕思，周艳萍，等.黄蜀葵花化学成分与药动学研究进展［J］.中南药学，2012，10（11）：839-841.

［3］张元媛，贾晓妮，曹永翔，等.黄蜀葵花化学成分研究［J］.西北药学杂志，2008，23（2）：80-82.

［4］薛彩福，郭建明，钱大玮，等.黄葵醇提物中黄酮类成分在体肠吸收研究［J］.药学学报，2011，46（4）：454-459.

［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：287.

［6］曹广尚，杨培民，李芳.HPLC测定贯叶金丝桃滴丸中金丝桃苷含量［J］.中国中医药信息杂志，2014，21（7）：67-68.

［7］方慧祥，杨坤芬，冯玉茹.RP-HPLC法测定补肾强身片中金丝桃苷的含量［J］.中国药房，2015，26（3）：413-415.

［8］田元春，刘倩，韦水林，等.HPLC测定参杞强精胶囊中金丝桃苷含量［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19（14）：149-151.

［9］崔慧芳，常欣.高效液相色谱法测定月季花中金丝桃苷含量［J］.中国药业，2013，22（11）：4-5.

［10］刘丽娜，李勇军，何迅，等.高效液相色谱法测定荭叶心通软胶囊中金丝桃苷含量［J］.中国药业，2008，17（10）：25-26.

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Determination of Hyperin in Solid Dispersion of Abelmoschus Manihot Total Flavones by HPLC

Qian Fang，Liu Zhihui，Lu Chao
（Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing，Jiangsu，China 210029）

Objective To establish a method for the determination of hyperin in solid dispersion of Abelmoschus Manihot total flavones by HPLC.Methods The Hedera C18column（250 mm×4.6 mm，5μm）was used，the mobile phase was acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution with gradient elution.The flow rate was 1.0 mL/min，the detection wavelength was 360 nm，and column temperature was 30℃.Results The linear range of hyperin was 1.140 6-72.998μg/mL（r=1.000 0），the average recovery rate was 99.01%，and RSD was 1.94%（n=9）.Conclusion The method is simple，rapid，accurate and reliable.It can be used for the content determination of hyperin in solid dispersion of Abelmoschus Manihot total flavones.

Abelmoschus Manihot total flavones；solid dispersion；HPLC；hyperin

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）22-0112-03

钱芳（1975-），副主任中药师，主要从事中药制剂和新药研究工作，（电子信箱）qfss1024@126.com。

2015-06-23）

*江苏省中医药局资助项目，项目编号：LZ13063。