王淼等

摘要

[目的]构建FMDV乳酸杆菌穿梭表达载体。[方法]从A型FMDV中克隆出VP1基因后，根据乳酸杆菌密码子偏好性对VP1进行优化，与表达载体pSIP411进行连接，并将连接产物转化到DH5α中筛选出阳性克隆菌，重组质粒酶切和PCR鉴定成功后再转化到BL21中，采用杆菌肽进行诱导表达。[结果]表达产物经SDSPAGE和Western blottmy 检测在24 kD处有明显的条带，证明VP1pSIP411重组表达载体构建成功并在BL21中成功表达。[结论]为后续乳酸杆菌表达VP1蛋白研究奠定了基础。

关键词口蹄疫病毒；VP1；pSIP；乳酸菌；大肠杆菌

中图分类号S188文献标识码A文章编号0517-6611（2015）21-025-03

口蹄疫（FootandMouth Disease，FMD）是一种高度传染性和经济破坏性的家畜疫病，能够引起家畜生产性能降低，患病仔畜高死亡率，对畜牧行业造成巨大损失。除对动物贸易的扰动外，FMD的暴发还会造成严重的经济和社会影响，包括对饲料行业、兽药行业和旅游相关产业的破坏。尤其重要的是，它制约了发展中国家的畜牧业发展，特别对无FMD病原的国家和地区能够造成巨大的经济损失。如2001年荷兰和英国、2007年英国暴发的FMD造成的惨重损失[1]。

FMD的病原是口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus， FMDV），是单链正义RNA病毒，属于微小RNA病毒科口蹄疫病毒属。病毒基因组全长约 8.5 kb，有 7 个血清型，即O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3（即南非1、2、3型）和Asia1（亚洲1型），型间无交叉保护。其开放阅读框由 L 基因、P1 结构蛋白基因（包括VP4、VP2、VP3、VP1基因）、P2非结构蛋白基因（包括2A、2B、2C基因）和P3非结构蛋白基因（3A、3B、3C、3D基因）组成。其中，VP1蛋白带有诱导FMD免疫反应的关键表位，包括VP1的141～160，200～213和21～40位氨基酸。VP1基因全长636 nt，是编码FMDVVP1蛋白的免疫原性基因。围绕VP1分子，目前研究较热的FMD基因工程疫苗包括亚单位疫苗、可饲疫苗、蛋白质载体疫苗、基因缺失疫苗、活载体疫苗和核酸疫苗等[2-3]。……