刘志发 潘腾飞 潘东明

摘 要 利用RT-PCR技術从‘琯溪蜜柚中克隆得到1条PME（pectinmethylesterase）基因的ORF序列，命名为CmPME1。该序列编码一个含有582个氨基酸的蛋白质，分子量63.37 ku，该蛋白属于稳定的碱性亲水性蛋白。同源性分析表明：其编码的氨基酸序列与可可树（Theobroma cacao）、毛果杨（Populus trichocarpa）的同源性分别为76%、74%，与甜橙的氨基酸序列同源性高达99%。实时荧光定量PCR结果表明，随着果实的发育，CmPME1的表达量逐渐升高，在花后170 d达到最高，然后逐渐降低，远中柱汁胞CmPME1的表达量高于近中柱。

关键词 琯溪蜜柚；PME；克隆；实时荧光定量PCR

中图分类号 S813.3 文献标识码 A

琯溪蜜柚[Citrus maxima（Burm.） Merr.]果实存在汁胞粒化的生理病害， 表现为汁胞中柱和轴端汁胞异常膨大， 汁胞变硬、细胞壁加厚、木质纤维化、出汁率下降， 风味变淡。琯溪蜜柚果实汁胞粒化通常从囊瓣近蒂端汁胞发生， 后渐向果心发展， 其中以果心处长形汁胞粒化最为严重[1-3]。据观察，琯溪蜜柚果实汁胞粒化发生在果实生长后期（一般为9月中下旬开始），采后贮藏期间果实汁胞粒化进一步加重[2]。有报道指出果胶甲酯酶与柑橘果实的粒化有关[4-5]。

果胶甲酯酶（pectinmethylesterase，简称PME、PE， EC： 3. 1. 1. 11）广泛存在于植物以及一些细胞壁降解的微生物中[6]。果胶甲酯酶能水解果胶生成果胶酸、甲醇、氢离子，进而导致果胶酸钙的形成[7-9]。PME属于多基因家族，由于PME结构和表达模式的多样性，其作用也存在差异[10-11]。植物中果胶甲酯酶在细胞壁降解[12-13]，小孢子发生和花粉管发育[14-16]，种子萌发[17]，根尖延伸[18]，果实的软化成熟[19]等方面起着重要作用。近几年来，在植物中有关PME基因的克隆与表达已有许多报道，已从草莓、烟草、白菜等植物中克隆得到果胶甲酯酶基因[20-22]，认为该基因与果实衰老过程中结构变化、植物病毒之间存在相互作用、雄性不育等功能有关。……