王岚，刘新，张帆，肖纯凌

（1.辽宁省环境污染与微生态重点实验室，辽宁沈阳 110034；2.沈阳医学院基础医学院病原生物学教研室；3.沈阳医学院基础医学院临床医学专业2011级2班）

重组人铜锌超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的表达研究

王岚1，2，刘新1，2，张帆3，肖纯凌1*

（1.辽宁省环境污染与微生态重点实验室，辽宁沈阳 110034；2.沈阳医学院基础医学院病原生物学教研室；3.沈阳医学院基础医学院临床医学专业2011级2班）

目的：构建人铜锌超氧化物歧化酶（hCu，Zn-SOD）原核表达载体并诱导其表达，纯化及鉴定目的蛋白，为其临床应用奠定基础。方法：根据已报道的hCu，Zn-SOD基因序列，采用RT-PCR技术从外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）中获得SOD cDNA序列。将所得的PCR产物插入原核表达载体pET22b（+）中，重组质粒经酶切、PCR及测序鉴定正确后，将其转化至大肠杆菌Rosseta（DE3），通过异丙基硫代半乳糖苷（isopropyl thiogalactoside，IPTG）诱导表达出目的蛋白，经镍固定金属亲和层析纯化。采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD生物学活性。结果：序列分析表明SOD基因成熟肽编码区含有465 bp与GenBank（X02317）中已报道序列一致的SOD核苷酸。经IPTG诱导表达，十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分析显示表达的目的蛋白分子量约为19 kD，免疫印迹分析显示其与商品化的His-tag抗体呈特异性反应，但主要以包涵体形式表达，可溶性蛋白表达量很少。经Ni2+-NTA琼脂糖纯化获得SDSPAGE电泳下单一条带。可溶蛋白酶活力为460 U/ml（SOD的酶比活力为630 U/mg）。结论：在大肠杆菌中获得了人源SOD的高效表达，为研究其生物学功能及广泛应用奠定了基础。

超氧化物歧化酶；大肠杆菌；……