高　新　张吉水　姬汉书　郭忠建　王文龙　刘雅刚

胆汁内外引流术对梗阻性黄疸大鼠肝脏TSGF和CA19-9表达的影响

高新张吉水★姬汉书郭忠建王文龙刘雅刚

目的 探讨胆汁内外引流术对梗阻性黄疸（OJ）大鼠肝脏肿瘤特异性生长因子（TSGF）和糖类肿瘤相关抗原（CA 19-9）表达的影响。方法 采用改良方法制备OJ、胆汁内引流组（ID）、胆汁外引流组（ED）和假手术组（SH）共120只SD大鼠模型，采用快速检测试剂盒检测大鼠肝脏TSGF和CA 19-9水平，采用t检验、关联性分析等比较组间差异及其生物学意义。结果 SH组的TB、ALT、AST水平最低，ID次之，ED及OJ组的TB、ALT、AST水平均高于SH、ID组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；SH组的ALB最高，ID次之，ED组再次，OJ组最低（P＜0.05）；SH组的TSGF及CA 19-9水平最低，ID次之，ED及OJ组最高，差异均有统计学意义（P＜0.05）；TSGF及CA 19-9与TB呈正相关关系，与ALB呈负相关关系（P＜0.05）。结论 胆汁内外引流术可有效缓解梗阻性黄疸大鼠的胆汁淤积状况，明显改善大鼠的肝功能，降低由此诱发的肿瘤危险性；相同的条件下，胆汁内引流效果更佳。

胆汁内外引流术 肿瘤特异性生长因子（TSGF） 糖类肿瘤相关抗原（CA 19-9）梗阻性黄疸

梗阻性黄疸（Obstructive Jaundice，OJ）多由胆管结石、胆管炎、胆管肿瘤、胰腺肿瘤等导致，又名外科性黄疸［1～3］。胆汁内外引流术是目前临床上常用的治疗OJ的外科手术治疗。肿瘤特异性生长因子（TumorSupplied Group of Factors，TSGF）由于对恶性肿瘤血管增生起重要作用而对非恶性肿瘤血管增生无明显关系，因此，TSGF对恶性肿瘤具有高度特异性（95%）和灵敏度（85%）。CA 19-9为糖类肿瘤相关抗原，在消化道肿瘤组织中，其阳性检出率较高。近年来，临床上常用TSGF、CA 19-9水平作为判断OJ严重程度的判断指标。本研究于2013年2月至9月探讨对OJ大鼠模型实施胆汁内外引流术后，其肝脏组织中TSGF及CA 19-9的表达水平及其临床意义，为人OJ的临床治疗提供参考。

1　材料及方法

1.1主要仪器及试剂 EG1120型石蜡包埋机（LEICA，美国）、生物组织自动脱水机（浙江省金华市科迪仪器设备有限公司）、轮转式切片机（LEICA，美国）、显微摄像及图像分析系统（OLYMPUS，德国）、10%福尔马林溶液、DAB显色试剂盒、苏木素（北京中杉金桥生物技术有限公司）、0.01M枸橼酸盐、0.01M磷酸盐、3%过氧化氢溶液、二甲苯、丙酮（北京化学试剂公司）。1.2 实验动物 成年健康SD雄性大鼠120只，体重290～360g，购于河北医科大学动物实验中心，自由饮食饮水，饲养环境温度为15～20℃。采用单纯随机化的方法将120只SD大鼠分为4组，分别为OJ组、胆汁内引流组（ID）、胆汁外引流组（ED）和假手术组（SH），各30只［4］。

1.3测量指标 （1）生化指标：采用美国AU5800全自动生化分析仪检测四组标本的血清总胆红素（TB）、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）等指标。（2）TSGF及CA19-9检测：采用TSGF快速检测试剂盒（北京方程生物科技有限公司）生化比色法测定血清TSGF，严格按说明书要求操作。评判标准：TSGF值≥64 U/ml为阳性，TSGF值＜64U/ml为阴性。采用CA 19-9快速检测试剂盒（杭州华得森生物技术有限公司）放射免疫分析法测定血清CA 19-9，严格按说明书要求操作。评判标准：CA 19-9值≥37U/ml为阳性，＜37U/ml为阴性。

1.4血液标本采集与保存 动物模型制备成功后，麻醉处死大鼠，开胸心脏穿刺抽取静脉血6ml，不加抗凝剂，室温静置10min，4℃、3000 rpm离心15 min，分离上层血清，置-70℃保存备用。OJ、SH组于术后7d取血液标本；ED、ID于二次手术后7d取血液标本。对于中途死亡的大鼠，死亡后0.5h内取血液标本。

1.5统计学分析 采用SPSS17.0 统计软件。计量资料以（±s）表示，采用t检验，不同时间点的比较采用重复测量的方差分析进行比较；计数资料采用构成比描述，采用χ2检验； P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1四组大鼠基本情况 OJ组：食欲、食量下降，活动明显减少，毛发发暗，黄染更为严重，粪便成白色，尿液深黄，解剖可见肝脏肿大，结扎近端胆管膨大，其内见黄色的胆汁。ED组：饮食及活动量没有变化，大量胆汁经外引流管由颈背部排出，颈部切口有时可见感染。开腹见肝脏肿大，质硬，腹腔组织粘连较重。ID组：大鼠饮食及活动量增加，体重增加，大小便颜色正常。解剖后肝脏形态基本恢复，质软。SH组：大鼠饮食活动正常，皮肤颜色正常，大小便无黄染，切口愈合快。大鼠肝脏形态正常，胆管正常，未见膨胀胆管。

2.2各组大鼠的死亡情况 共有90只大鼠进行了胆管结扎，共有38只大鼠死亡，总死亡率为42.22%。ID组大鼠死亡8只，死亡率为26.67%。ED组大鼠死亡14只，死亡率为46.67%。OJ组大鼠死亡16只，死亡率为53.33%。

2.3术后四组大鼠常规生化指标比较 见表1。

表1　各组术后生化指标水平比较（x±s）

2.4术后四组大鼠TSGF及CA 19-9水平比较 见表2。

表2　各组术后TSGF及CA 19-9水平比较（IU/mL，（x±s）

2.5术后四组大鼠TSGF及CA 19-9阳性率比较 见表3。

表3　术后四组大鼠TSGF及CA 19-9阳性率比较［n（%）］

2.6TSGF及CA 19-9与TB、ALB的关联性分析 TSGF及CA 19-9与TB呈正相关关系，与ALB呈负相关关系，均有统计学意义（P＜0.05）。

3　讨论

OJ是较常见的一种黄疸，特别是恶性OJ，严重影响患者的身体健康。恶性OJ与恶性肿瘤关系密切。TSGF是一种与恶性肿瘤发生、发展、严重程度等均具有重要关联的糖类物质和代谢物的总称。一般情况下，若机体产生了恶性肿瘤细胞时，TSGF水平明显高于正常值；另一方面，当体内TSGF水平明显升高时，则可预警机体发生恶性肿瘤危险增加。CA 19-9是一种糖类肿瘤相关抗原，亦可作为判断恶性肿瘤是否存在的生物标志物，与TSGF一样，若机体有恶性肿瘤，CA 19-9明显升高［5，6］。

临床上一般采用手术治疗OJ，但其并发症和病死率较高［7，8］。可能与OJ时机体的细胞因子、炎症介质等多种因素参与了免疫功能的调节有关。目前，关于术前是否有必要解除黄疸，在外科手术中的临床效果仍有待进一步验证。本研究术前解除了黄疸对OJ模型大鼠肝脏的TSGF和CA 19-9水平的影响，探讨胆汁内外引流术的临床价值［9～12］。

本研究首先检测、分析比较了四组大鼠的肝功能生化指标水平。结果显示，OJ组大鼠肝脏功能损害最严重，ED组次之，ID再次之，SH组大鼠肝脏功能损害最轻。肝炎、胆囊炎、胆结石、肿瘤、胆瘀性肝炎等病变均可能导致TB、ALT、AST异常升高，这体现了肝脏代谢异常、炎症等功能紊乱；ALB异常下降也表明肝脏功能的损伤，提示OJ可直接损伤大鼠肝脏功能，可以与肝脏胆汁排泄受阻有直接关系［13～15］。OJ、ID、ED组大鼠的TSGF、CA 19-9水平和阳性率均明显高于SH组，表明OJ越严重，肝脏的肿瘤标志物含量升高，其可能患恶性肿瘤的危险增加。本资料采用关联性分析，验证了TSGF、CA 19-9水平和阳性率升高的临床意义，发现TSGF、CA 19-9水平与TB具有正相关关系，与ALB具有负相关关系，而TB、ALB可直接反映肝功能状况，说明TSGF、CA 19-9水平可通过直接反映梗阻性大鼠肝功能而提示黄疸的严重程度。

综上所述，胆汁内外引流术可以有效缓解OJ大鼠的胆汁淤积状况，明显改善大鼠的肝功能，降低由此诱发的肿瘤危险性；相同的条件下，胆汁内引流效果更佳。

1 Wu Z,Kuntz A,Wadleigh RG. CA 19-9 tumor marker： is it reliable？A case report in a patient with pancreatic cancer. Clin Adv Hematol Oncol,2013,11（1）： 50～52.

2 Duffy MJ,Sturgeon C,Lamerz R,et al. Tumor markers in pancreatic cancer： a European Group on Tumor Markers（EGTM）status report. Ann Oncol,2010,21（3）： 441～447.

3 Kim HR,Lee CH,Kim YW,et al. Increased CA 19-9 level in patients without malignant disease. Clin Chem Lab Med,2009,47（6）： 750～754.

4 Li W,Chung SC. An improved rat model of obstructive jaundice and its reversal by internal and external drainage. J Surg Res,2001,101（1）： 4～15.

5 Ballehaninna UK,Chamberlain RS. The clinical utility of serum CA 19-9 in the diagnosis,prognosis and management of pancreatic adenocarcinoma： an evidence based appraisal. J Gastrointest Oncol, 2012, 3（2）： 105～119.

6 Korkmaz M,Ünal H,Selçuk H,et al. Extraordinarily elevated serum levels of CA 19-9 and rapid decrease after successful therapy： a case report and review of literature. Turk J Gastroenterol,2010,21（4）： 461～463.

7 Bo Deng,Qun-You Tan,Xiao-Qing Fan,et al. Clinical Value of Assaying Tumor Supplied Group of Factor/Tumor Specific Growth Factor in Patients With Solitary Pulmonary Nodule. Clinical Lung Cancer,2011,12（3）： 192～196.

8 Zhang GY,Li WT,Peng WJ,et al. Clinical outcomes and prediction of survival following percutaneous biliary drainage for malignant obstructive jaundice. Oncol Lett,2014,7（4）： 1185～1190.

9 Wang C,Xu Y,Lu X. Should preoperative biliary drainage be routinely performed for obstructive jaundice with resectable tumor？ Hepatobiliary Surg Nutr,2013,2（5）：266～271.

10 Fang Y,Gurusamy KS,Wang Q,et al. Meta-analysis of randomized clinical trials on safety and efficacy of biliary drainage before surgery for obstructive jaundice. Br J Surg, 2013 Nov,100（12）：1589～1596.

11 Baghel K,Raj S,Awasthi I,et al. A comparative analysis of nasogastric and intravenous fluid resuscitation in patients with malignant obstructive jaundice prior to endoscopic biliary drainage. N Am J Med Sci. 2013 Sep,5（9）：523～528.

12 Sun J,Liu G,Yuan Y,et al. Operable severe obstructive jaundice： how should we use pre-operative biliary drainage？ S Afr J Surg. 2013 Oct22,51（4）：127～130.

13 Wang SZ,Wang XB. Effects of biliary drainage on the intestinal barrier function in obstructive jaundice. Hepatogastroenterology. 2013 Sep,60（126）：1284～1288.

14 Choi J,Ryu JK,Lee SH,et al.Palliative treatment of unresectable hepatocellular carcinoma with obstructive jaundice using biliary drainage with subsequent transarterial chemoembolization. J Palliat Med,2013,16（9）：1026～1033.

15 Yilmaz B,Parildar Z,Bozkaya H,et al. Prognostic utility of serum neopterin in obstructive jaundice secondary to malignant lesions treated by percutaneous transhepatic biliary drainage. J Vasc Interv Radiol,2013,24（6）：865～872.

Objective To investigate the effects of internal and external biliary drainage on the expression of Tumor Supplied Group of Factors（TSGF）and tumor-associated carbohydrate antigen（CA 19-9）of rat model of obstructive jaundice. Methods Rat models of Obstructive jaundice（OJ），the biliary drainage group（ID），biliary drainage group（ED）and sham group（SH）were made and TSGF and CA 19-9 levels were detected for analysis. Results TB，ALT，AST of SH groups were the lowest，ID followed（P＜0.05）； ALB of SH group was the highest，ID followed（P<0.05）； TSGF SH group and the lowest levels of CA 19-9，ID followed，ED and maximum OJ group，the differences were statistically signifi cant（P<0.05）； TSGF and CA 19-9 were positively correlated with TB，but with ALB negatively（P＜0.05）. Conclusions Internal and external drainage of bile can effectively alleviate the situation obstructive jaundice cholestatic rats，signifi cantly improve the liver function in rats，thus reducing the risk of induced tumors； under the same conditions，the biliary drainage was better.

inside and outside the drainage of bile Tumor specifi c growth factor（TSGF） Carbohydrate tumor-associated antigen（CA 19-9） Obstructive jaundice

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