陈子松 李磊 周杭杰 应玲红

ESAT-6 INF-γ和ADA在结核性脑膜炎早期诊断中的应用

陈子松 李磊 周杭杰 应玲红

目的 探讨早期分泌性靶抗原-6（ESAT-6）、干扰素-γ（INF-γ）和腺苷脱氨酶（ADA）在结核性脑膜炎患儿早期诊断中的应用价值。方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测ESAT-6和INF-γ水平，采用酶动力学终点法检测ADA水平，并将各组结果进行对比分析。结果 结核性脑膜炎患儿急性期ESAT-6、INF-γ和ADA浓度均显著高于其恢复期水平和对照组（P＜0.05）。重症组ESAT-6、INF-γ和ADA浓度均显著高于轻症组，轻症组明显高于对照组（P＜0.05）。单项检测阳性率较低，三项联合检测能提高阳性检出率。结论 ESAT-6、INF-γ和ADA对结核性脑膜炎患儿早期诊断具有重要的临床价值，三者联合检测能减少漏诊。

结核性脑膜炎 早期分泌性靶抗原-6 干扰素-γ 腺苷脱氨酶

结核性脑膜炎（结脑）是由结核分枝杆菌引起的脑膜非化脓性炎症，其临床症状不典型，但病情进展迅速，及时诊断和合理治疗是降低病死率和减轻后遗症的关键。随着免疫学的发展，较多免疫因子在临床上受到重视，脑脊液中早期分泌性靶抗原-6（ESAT-6）、干扰素-γ（INF-γ）和腺苷脱氨酶（ADA）浓度升高与结脑发病有密切联系，现报道如下。

1　临床资料

1.1一般资料 2010年10月至2013年9月在本院就诊的患儿32例，其中男18例，女14例；年龄3个月～14岁，平均（7.5±4.0） 岁。严格按照《实用儿科学》第7版诊断标准［1］。对照组25例为同期住院患儿，男13例，女12例；年龄5个月～14岁，平均（7.0±4.5）岁。排除中枢神经系统感染性疾病。

1.2标本采集和保存 所有患儿于入院后24h内（头痛、发热、脑膜刺激证）无菌条件下腰椎穿刺留取脑脊液2ml，2000r/min离心10min，取上清液贮存于-20℃冰箱。结脑患儿经抗结核治疗有效，临床症状体征好转，脑脊液细胞数、蛋白、糖和氯化物基本恢复正常为恢复期，此时留取脑脊液2ml，标本处理和贮存方法同上。1.3 检测方法和试剂 采用ELISA方法检测ESAT-6和INF-γ水平，用酶动力学终点法检测ADA水平。ESAT-6试剂盒由上海百沃科贸有限公司提供，INF-γ试剂盒由北京晶美生物工程有限公司提供，ADA试剂盒购自北京利德曼公司。

1.4统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验， P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1结脑组急性期、恢复期和对照组ESAT-6、INF-γ和ADA检测结果 见表1。

表1　结脑组三项指标检测结果

表1　结脑组三项指标检测结果

注：与恢复期和对照组比较，*P＜0.01

组别nEAST-6（ng/ml）INF-γ（pg/ml）ADA（U/L）结脑组32急性期63.5±19.2*58.0±21.4*15.1±6.5*恢复期12.0±3.810.7±4.56.3±3.7对照组2510.6±2.99.2±2.35.2±2.1

2.2结脑组患者重症组、轻症组和对照组ESAT-6、INF-γ和ADA检测结果 见表2。

表2　结脑组三项指标检测结果

表2　结脑组三项指标检测结果

注：与轻症组比较， *P＜0.05；与对照组比较， #P＜0.05

组别nEAST-6（ng/ml）INF-γ（pg/ml）ADA（U/L）重症组1287.1±28.6*76.5±29.3*24.7±10.8*轻症组2048.2±15.5#42.4±18.9#10.0±6.3#对照组2510.6±2.99.2±2.35.2±2.1

2.3结脑组ESAT-6、INF-γ和ADA单独和三项联合检测结果 单独检出阳性率较低，三项联合检测能提高阳性检出率。见表3。

表3　三项指标单独和三项联合检测结果比较

3　讨论

结脑的传统实验室诊断主要是脑脊液常规、涂片找结核分枝杆菌和结核分枝杆菌培养，前者阳性率低，后者培养时间长，均不能满足临床要求。结脑发病后，在结核分枝杆菌的刺激下，脑脊液中ESAT-6、INF-γ和ADA等表达水平显著升高，故检测其浓度的动态改变有助于对结脑的及时诊断。

EAST-6由结核分枝杆菌在早、中期分泌并释放于菌体外的一组蛋白，编码EAST-6的基因序列是卡介苗传代过程中丢失的一段基因，位于RD1区， 该基因序列在卡介苗和非致病性环境分枝杆菌中缺失，因此，EAST-6具有结核分枝杆菌特异性［2］。结核分枝杆菌直接分泌的ESAT-6浓度较低，但结核分枝杆菌被单核巨噬细胞吞噬并在细胞内生长后，ESAT-6蛋白的量会明显增高［3］。一旦脑脊液中检测到高浓度的EAST-6表达，其不仅代表有结核分枝杆菌感染，更表明结核分枝杆菌在体内大量繁殖。吴晓牧等［4］采用ELISA检测脑脊液中ESAT-6，敏感度为76.09%，特异度为98.18%。

INF-γ是主要由活化的T细胞和NK细胞产生，具有调节免疫系统作用的一个免疫调节因子。INF-γ是一种非常重要的促炎性细胞因子，能够促进巨噬细胞、T细胞等免疫细胞增殖和活性。ESAT-6是刺激淋巴细胞分泌INF-γ的重要抗原分子，因此检测ESAT-6及其刺激后产生的INF-γ对结脑的诊断有重要帮助［5］。INF-γ具有双重作用，高浓度的INF-γ加强免疫反应，对中枢神经系统损伤加重；另一方面，免疫有利于机体对结核分枝杆菌的清除［6］。ADA是一种巯基酶其是嘌呤核苷酸代谢的关键酶。体液免疫和细胞介导免疫在结脑的病理生理产生过程中起到关键作用，ADA活性可以用来作为鉴别诊断结核与其他感染性和非感染性疾病的指标［7］。本资料结果表明，结脑患儿急性期ESAT-6、INF-γ和ADA浓度均显著高于其恢复期水平，亦显著高于对照组（P＜0.05）。重症组ESAT-6、INF-γ和ADA浓度均显著高于轻症组，轻症组显著高于对照组（P＜0.05）。单项检测阳性率较低，三项联合检测能提高阳性检出率。

综上所述，ESAT-6、INF-γ和ADA在结脑患儿早期诊断中具有重要的应用价值，三者联合检测能弥补单项检测的缺陷，提高结脑的检出率。

1 胡亚美，吴瑞萍，主编.诸福棠实用儿科学（上册）.第7版.北京：北京卫生出版社，2002.759～762.

2 何俊瑛，刘士甫，朱艳霞，等.脑脊液单核细胞内EAST-6检测对结核性脑膜炎的诊断意义. 脑与神经疾病杂志，2010，18（3）：209～212.

3 徐苗，王国治，罗永艾.ESAT-6蛋白在结核病诊断中的研究进展.国外医学内科学分册，2006，33（11）：481～484.

4 吴晓牧，刘丽娟，许志强，等.早期诊断结核性脑膜炎的新方法：检测浓缩脑脊液中CFP-10和ESAT-6.中国免疫学杂志，2012，28（4）：347～350.

5 程言博，周延龙，董艳，等.ESAT-6诱导的外周血单个核细胞γ-干扰素反应对结核性脑膜炎的诊断价值.徐州医学院学报，2012，32（7）：448～450.

6 李志惠，崔丹，赵杰，等.结核性胸膜炎胸液结核分枝杆菌特异性INF-γ与ADA的关系.河北医药，2013，35（21）：3232～3233.

7 陈仕检，石胜良，张跃龄，等. 结核性和非结核性脑膜炎患者脑脊液中ADA及NSE表达水平的对比分析. 内科，2013，8（1）：16～18.

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