雷　燕，张会军，王　娟，张文文，唐绍林，肖　洋，王雪鹏

(1. 广州利洋水产科技股份有限公司，广东　广州　510515；2. 广州金水动物保健品有限公司，广东　广州　510515；3. 山东农业大学动物科技学院，山东　泰安　271018)

鱼类类立克次氏体PCR检测方法的建立及初步应用

雷燕1,2，张会军1,2，王娟1,2，张文文1,2，唐绍林1,2，肖洋1,2，王雪鹏3

(1. 广州利洋水产科技股份有限公司，广东广州510515；2. 广州金水动物保健品有限公司，广东广州510515；3. 山东农业大学动物科技学院，山东泰安271018)

根据GenBank中类立克次氏体基因的保守序列，设计一对针对鱼类类立克次氏体PCR检测的特异性通用引物，通过对PCR扩增条件的优化，建立快速检测鱼类类立克次氏体的PCR方法，并用该方法对类立克次氏体阳性罗非鱼（Oreochromis nilotica）进行PCR扩增，结果得到与实验设计相符的390 bp的特异性扩增条带，而对健康罗非鱼、乌鳢（Ophiocephalus argus）、海鲈（Dicentrarchus labrax）、中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）及其他对照组的扩增结果为阴性。测序比对结果证实，该PCR方法检测结果准确，最低可检测出约1 pg的类立克次氏体质粒DNA；利用建立的PCR方法，对来自广东、云南、海南、天津、江苏、安徽、湖北等地的252份临床样品进行检测，共检出阳性样品30份，提示该PCR方法可用于类立克次氏体的临床快速检测。

鱼类类立克次氏体；PCR检测；临床应用

对于水产养殖动物，已明确立克次氏体具有病原学意义，目前，鲑的立克次氏体已明确记述，称为鲑鱼立克次氏体（Piscirickettsia salmonis）[1]，而其他水产动物的立克次氏体未明确记述，称为类立克次氏体。类立克次氏体为一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物，一旦感染，致死率较高。……