贾慧等

摘要： 为研究玉米大斑病菌黑色素合成调控基因[WTBX][STBX]StMR1[WTBZ][STBZ]的功能，采用PCR方法克隆得到[WTBX][STBX]StMR1[WTBZ][STBZ]基因3 021 bp的OFR序列，将其插入到含有色氨酸强启动子、GFP和bar基因抗性的质粒pBARKS1-eGFP上构建回复载体pBARKS1-MR-eGFP，通过测序、双酶切验证载体构建情况。结果显示，pBARKS1-MR-eGFP载体构建成功，可以进行基因回复转化试验。该结果为进一步确定黑色素合成调控途径，进而明确黑色素合成调控机制奠定基础。

关键词： 玉米大斑病菌；黑色素；调控基因；[WTBX][STBX]StMR1[WTBZ][STBZ]

中图分类号： S435.131.4+9 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2015）08-0024-03

玉米大斑病在世界范围内广泛存在，是我国冷凉地区如东北、华北和西南玉米区重要叶部病害 [1-2]，种植感病品种如遇到流行年份可减产50%以上。例如，2012年受布拉万台风的影响，东北地区潮湿多雨，玉米大斑病大暴发，平均危害程度3～5级，严重地块达9级。引起该病害的病原菌属半知菌突脐蠕孢属，1876年在意大利首次报道，其无性态为玉米大斑凸脐蠕孢菌（Exserohilum turcicum），有性态为玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）。有研究发现，玉米大斑病菌代谢产生的DHN黑色素是该病菌致病的重要毒力因子，沉积在真菌特化结构、附着在胞细胞壁和细胞膜之间，产生机械压力突破寄主表皮细胞，使植物染病 [3]。

DHN黑色素合成途径至少有聚酮体合成酶、还原酶、脱水酶、氧化酶4类蛋白酶参与。起始于1个聚酮体合成酶（polyketide synthase），催化醋酸盐合成1，3，6，8-4THN，经还原酶（1，3，6，8-tetra-HN reductase）催化合成小柱孢酮（scytalone），脱水酶（scytalone dehydratase）催化合成1，3，8-THN，还原酶（1，3，8-tetra-HN reductase）催化合成柱孢醌（vermelone），再经脱水酶催化合成1，8-DHN，最后经氧化酶（laccase）氧化聚合形成1，8-DHN黑色素。另外，该途径中还存在一种调控黑色素生物合成的转录因子MR [4]。……