于红梅　肖传刚　褚秀玲等

摘要： 采用苯酚-硫酸法对淫羊藿多糖含量进行测定。结果表明，淫羊藿粗多糖的平均得率为5 81%，淫羊藿粗多糖中多糖的平均含量是42 36%，淫羊藿中多糖平均含量为2 46%。

关键词： 淫羊藿；多糖；测定方法

中图分类号： R284 2 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2015）08-0314-02

淫羊藿是小檗科淫羊藿属多年生草本植物，是我国传统中药之一，具有很高的药用价值，《本草纲目》记载：“茎、叶入药，辛温无毒，有坚筋骨、益精气、补腰膝、强心力等作用 [1]。”淫羊藿的主要有效成分为淫羊藿苷和淫羊藿多糖。有研究发现，多糖能控制细胞分裂和分化，调节细胞的生长与衰老，尤其在抗肿瘤、抗病毒、降血脂、增强免疫功能等方面的作用更明显 [2-3]。淫羊藿多糖是一种具有发展前景的免疫调节剂，本研究即通过苯酚-硫酸法测定淫羊藿多糖的含量 [4]，为淫羊藿的应用提供有利的理论依据，并为多糖更深入的研究提供部分理论基础。

1 材料与方法

1 1 仪器和试剂

HH-8恒温水浴锅、RE52CS旋转蒸发仪、B-220恒温水浴锅、UV-1800分光光度计、粉碎机、离心机、计时器、电子分析天平等。

淫羊藿干品（购自山东省聊城利民大药店）、浓硫酸、95%乙醇、苯酚、葡萄糖，均为国产分析纯试剂。

1 2 方法

1 2 1 淫羊藿多糖标准曲线的建立

将1 9 g 烘干的分析纯葡萄糖溶于1 L重蒸水中，制成1 9 mg/mL标准溶液 [5]；然后取标准溶液1、2、3、4、5、6、7、8 mL分别用重蒸水稀释到100 mL，制成浓度为19、38、57、76、95、114、133、152 μg/mL的溶液；取各浓度溶液0 6 mL置于干燥的洁净试管中，加入 50 mg/mL 苯酚溶液1 2 mL，混合均匀，迅速加入5 0 mL浓硫酸，混合均匀，60 ℃水浴加热30 min，于波长490 nm处测定吸光度 [6]；重蒸水作为空白管对照。以糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标制得标准曲线。

1 2 2 粗多糖的提取与纯化

将购买来的淫羊藿干品粉碎过40目筛，制成淫羊藿干粉。称取3份淫羊藿干粉5 00 g，置于250 mL容量瓶中，加入125 mL蒸馏水，浸泡30 min，在90 ℃下提取3次，每次提取2 h，离心，合并滤液，用旋转蒸发仪将提取液浓缩至30 mL左右，加入95%乙醇，使得含醇量达到70%，静置过夜，抽滤，室温恒温干燥，得到浅棕黄色的淫羊藿粗多糖固体，备用。

1 2 3 粗多糖的得率 将干燥得到的淫羊藿粗多糖称质量，减去滤纸的质量，计算可得淫羊藿粗多糖的得率。

1 2 4 样品溶液的制备 称取0 19 g淫羊藿粗多糖，溶解于100 mL容量瓶中定容，作为样品液。

1 2 5 精密度试验 精确吸取同一种样品溶液4 mL，加水至100 mL；再精确吸取上述样品液0 6 mL，按照标准曲线方法操作，测吸光度，重复测定5次 [7-8]。

1 2 6 稳定性试验 精确吸取同一种样品溶液4 mL，加水至100 mL；再精确吸取上述样品液0 6 mL，按照标准曲线方法操作，每隔30 min测1次吸光度 [7-8]。

1 2 7 重复性试验 精确吸取同一种样品溶液4 mL，加水至100 mL；再精确吸取上述样品液0 6 mL，按照标准曲线方法操作，测吸光度，重复测定5次 [7-8]。

1 2 8 加样回收试验 [7-8] 精确吸取同一种样品溶液 4 mL，加水至100 mL，精确吸取上述样品液2 mL，分别加入浓度不同的葡萄糖标准溶液2 mL；再精确吸取上述样品液 0 6 mL，按照标准曲线方法操作，测吸光度。

1 2 9 样品的含量测定 精确吸取样品溶液4 mL，加水至100 mL；再精确吸取上述样品液0 6 mL，按照标准曲线方法操作，测吸光度。采用苯酚-硫酸法对淫羊藿多糖含量进行测定。

2 结果与分析

2 1 淫羊藿多糖测定方法的建立

通过对不同浓度葡萄糖标准溶液吸光度D的测定，结果显示不同浓度葡萄糖标准溶液与相应的吸光度D线性关系良好（图1）。线性方程为y=0 005 7x+0 006 5，r2=0 999，表明葡萄糖浓度在19～152 μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2 2 粗多糖的得率

将干燥得到的淫羊藿粗多糖称质量，减去滤纸的质量，计算可得淫羊藿粗多糖的得率（表1），淫羊藿粗多糖得率的平均值为5 81%。

2 4 稳定性试验

稳定性试验结果如表3，样品1、样品2、样品3在150 min内的稳定性RSD分别为0 49%、0 38%、0 44%，即试验在150 min之内稳定性良好。

3 结论

采用苯酚-硫酸法对淫羊藿多糖含量进行测定，测得淫羊藿粗多糖的平均得率为5 81%，淫羊藿粗多糖中多糖的平均含量是42 36%，淫羊藿中多糖平均含量为2 46%。淫羊藿中的主要成分是淫羊藿苷和淫羊藿多糖，因此，对于淫羊藿多糖含量进行测定是评价其质量的标准之一，为淫羊藿的应用提供更有利的理论依据，同时也为多糖的研究提供部分理论基础。本试验采用水提醇沉法提取淫羊藿多糖，该方法简单、易操作，并对提取的多糖进行醇沉纯化，使得结果更准确。通过精密度试验和加样回收试验结果可知，苯酚-硫酸法方法可靠、重复性高、显色性稳定性较好等，适合作为淫羊藿多糖含量的测定方法。

参考文献：

[1] 陈 旋，张 翼，张剑波 植物多糖的研究进展[J] 中国新药杂志，2007，16（13）：1000-1005

[2]郭宝林，罗崇念，肖培根 淫羊藿多糖研究进展[J] 中国中药杂志，1998，23（7）：52-53

[3]苟春林，张 艳，李 健 宁夏构杞多糖的提取分离与组成[J] 江苏农业科学，2013，41（6）：246-247

[4]徐晓飞，陈 健 多糖含量测定的研究进展[J] 食品科学，2009，30（21）：443-448

[5]刘宝岩 淫羊藿多糖提取方法的优化[J] 广西轻工业，2009，25（12）：7-8，23

[6]柳凤祥，张万福 淫羊藿多糖的超声波提取与含量测定研究[J] 山东农业大学学报：自然科学版，2008，39（4）：533-535

[7]胡 涛，黎云祥 四川淫羊藿多糖的含量测定[J] 西华师范大学学报：自然科学版，2006，27（4）：400-402

[8]王 超，张曜武 改良-差示酚硫法的建立及对淫羊藿多糖的含量测定[J] 西北药学杂志，2011，26（4）：257-259endprint