许奕　宋顺　王安邦等

摘要： 以铁皮石斛的无菌组培苗 为材料，探讨不同培养基、激素对组培苗壮苗生根的影响，同时筛选出最适合移栽组培苗的基质。结果表明：最适合铁皮石斛壮苗生根的培养基为MS+0 5 mg/L NAA+0 5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+ 8 g/L琼脂+1 g/L活性炭；移栽基质以泥炭土+树皮+碎砖+活苔藓组合效果最佳。

关键词： 铁皮石斛；壮苗生根；移栽；基质

中图分类号： S567 23+9 04 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2015）08-0247-03

铁皮石斛别称铁皮兰、吊兰、云南铁皮、铁皮吊兰，是兰科石斛属多年生草本植物，铁皮石斛是石斛类药材的上品，素有“中华仙草” “药中黄金”之美称，以茎入药，含有多糖、石斛碱、生物碱等有效成分，具有滋阴清热、生津益胃、润喉明目等功效，在抗肿瘤、提高人体免疫力、治疗胃肠道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治疗白内障等方面均有良好疗效 [1-4]。铁皮石斛大多生长在炎热潮湿的热带、亚热带的岩石缝隙中，繁殖率很低，自然野生状态下繁殖率只有10%～17%；果实为蒴果，种子小而多，种内胚发育不全或不成熟，胚胎少胚乳，自然结实率低于5%，在自然条件下须与兰菌共生才能萌发 [5-7]，因此无法在大田或苗床上播种，很难生产足够的实生苗用于栽培。铁皮石斛对生长环境要求苛刻，成苗困难，采用传统的分株、扦插等人工繁殖方法进行繁殖，增殖速度非常低，目前组织培养是铁皮石斛增殖扩繁的主要方法。关于铁皮石斛的组织培养已有相关报道，但还存在试管苗质量难以保证、移栽成活率低等问题，极大地制约了铁皮石斛生产规模的扩大 [2]。壮苗生根是铁皮石斛组织培养的关键。本试验对铁皮石斛的组培苗壮苗生根培养基进行优化，筛选出能够获得铁皮石斛优质移栽组培苗的培养基，以期为实现铁皮石斛产业化生产提供依据。

1 材料与方法

1 1 材料

选取长1～2 cm未长根的无菌试管苗进行试验。

1 2 方法

1 2 1 壮苗生根培养基的筛选 壮苗生根培养以MS培养基为基础培养基，设3个处理，分别为A1：MS+1 mg/L NAA+ 1 mg/L 6-BA；B1：MS+0 5 mg/L NAA+0 5 mg/L 6-BA；C1：MS+0 5 mg/L NAA。每个培养基中均加入30 g/L蔗糖、8 g/L 琼脂、1 g/L活性炭，pH值调至5 8±1 0，每处理接种20瓶，置于培养温度为（25±2） ℃、光照度为1 500～2 000 lx、光照时间12 h/d条件下培养。培养30 d后，统计组培苗的生根数、根长、株高等。

1 2 2 组培苗移栽基质的筛选

选取在壮苗生根培养基中生长状况良好、株高4～5 cm、根长4 cm、具有5条长根的组培苗移栽。首先将组培苗移至室外通风处炼苗2周左右，炼苗温度为20～25 ℃，将组培瓶盖逐日拧松，移栽前2 d揭盖，使组培苗逐渐适应自然环境。将培养基与小苗一起取出，先用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗几遍。移栽基质选用泥炭土、树皮、刨花、碎砖、细锯末进行不同比例（体积比）搭配，设计不同的移栽基质。移栽基质分别为A：泥炭土 ∶ 树皮 ∶ 刨花=3 ∶ 3 ∶ 4；B：泥炭土 ∶ 树皮 ∶ 碎砖=2 ∶ 3 ∶ 5；C：泥炭土 ∶ 树皮 ∶ 细锯末=2 ∶ 4 ∶ 4，均覆盖活苔藓。每处理重复3次，移栽后7、30 d分别统计铁皮石斛组培苗移栽成活率。

2 结果与分析

2 1 壮苗生根培养基优化试验

由表1可知，接种30 d后，A1处理下组培苗平均根长为2 3 cm，平均根数为3 4条，平均株高为3 7 cm。B1处理下组培苗平均根长为3 8 cm，平均根数为6 5条，平均株高 4 8 cm，丛生芽较少且生根率较高，试管苗叶片增大，呈长椭圆形，叶片变厚，呈深绿色，部分组培苗还长出较长的气生根，暴露于空气中。C1处理下组培苗平均根长为2 8 cm，平均根数为2 3条，丛生芽较多，生根率较低，叶片较小，呈浅绿色。由此可见，以上3种培养基中，组培苗在B1培养基中生长状态最佳，生根率可达100%，根长、根数、叶片形态更适于移栽（图1）。可见，添加不同浓度NAA、6-BA对于组培苗生根壮苗影响不同，同时添加了NAA、6-BA的组培苗比单独使用NAA的组培苗根长且多，叶片厚大。因此，B1处理（MS+ 0 5 mg/L NAA+0 5 mg/L 6-BA+30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂+ 1 g/L 活性炭）更适合铁皮石斛组培苗生根壮苗。

2 2 移栽基质优化试验

移栽时，试管苗由人工控制温度、光照、水分、养分的理想化无菌环境逐步转换到自然条件，移栽后根系由在原培养基内被动吸收水分、养分转变为主动吸收 [8]。铁皮石斛组培苗的移栽基质应以疏松、通透性好且不易发霉长菌的原料为主，并配合使用保水保肥的原料才能获得最佳成活率。以泥炭土、树皮、刨花、碎砖、细锯末等基质为材料，对铁皮石斛移栽基质进行初步筛选结果表明，移栽后7 d，A（泥炭土+树皮+刨花+活苔藓）、B（泥炭土+树皮+碎砖+活苔藓）、C（泥炭土+树皮+细锯末+活苔藓）3种基质上组培苗移栽成活率分别为89%、92%、90%，可见组培苗移栽后7 d内，这3种基 质上组培苗移栽成活率无明显差异。移栽后30 d，处理B下组培苗移栽成活率最高，达90%；处理A下组培苗移栽成活 率达到85%；处理C下组培苗移栽成活率达到77%（表2）。可见，碎砖透气性、透水性强，因此较适合被添加在基质中进行组培苗移栽。活苔藓保水效果较好，苔藓能够提供铁皮石斛生长所需的共生菌，铁皮石斛共生菌能够提高其移栽成活率 [9-10]。

3 结论与讨论

3 1 壮苗生根

铁皮石斛的壮苗生根是快速繁殖的关键阶段，关系到组培[CM（25]苗的整体质量 [4，11]。孟志霞等对比1/2 MS、MS、B5、N6等

4种培养基，认为MS、1/2 MS培养基效果明显好于其他2种培养基 [12]。本试验以MS培养基作为基本培养基，结果表明，在MS基本培养基中添加0 5 mg/L NAA、0 5 mg/L 6-BA 比较适合铁皮石斛的壮苗生根。唐桂香等研究表明，NAA浓度为0 5 mg/L时，铁皮石斛平均根数最多、根长最长 [7]。单独添加NAA的培养基效果不佳，说明6-BA对铁皮石斛的壮苗生根有重要作用 [13-16]。同时，NAA、6-BA浓度不宜过高，本试验中添加0 5 mg/L NAA、6-BA效果要优于添加1 mg/L NAA、6-BA。在壮苗生根培养基中常加入的添加物有香蕉汁、马铃薯汁、苹果汁、水解酪蛋白等。陈兆贵等研究发现，铁皮石斛壮苗生根培养基中加入10%香蕉提取液为最佳 [17]。周江明研究8种有机物对浙江省江山市江郎山铁皮石斛试管苗生长发育的影响，结果表明，生根以加入香蕉提取液为佳 [18]。魏梅娟等认为，香蕉对铁皮石斛根系生长具有显著促进作用 [19]。本试验中壮苗生根培养基也以 100 mL/L 香蕉汁作为添加物。

3 2 移栽

铁皮石斛的移栽基质以疏松透气、排水良好、肥料适量、无病菌虫害潜藏者为宜 [20-21]。袁正仿等研究发现，以泥炭土（100%）效果最好 [22]。付开聪等认为，无论是铁皮石斛的成活率、产量、粗壮程度还是高度，均以木块+苔藓移栽基质效果最好 [23]。朱艳等研究表明，最适宜的移栽基质是1/3泥炭+1/3锯末+1/3珍珠岩，覆以苔藓 [24]。吴雅等筛选出泥炭 ∶ 树皮 ∶ 刨花=2 ∶ 4 ∶ 4的基质配比作为铁皮石斛组培苗移栽的最佳基质 [25]。本试验表明，移栽效果最佳的组合是泥炭土+树皮+碎砖+活苔藓，该组合下铁皮石斛组培苗移栽成活率最高，且组培苗的长势也较好。

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