李琦，成莉凤，曾洁，刘朝阳，刘正初，*

(1.湖南农业大学植物保护学院，长沙410128;2.中国农业科学院麻类研究所，长沙410205;3.湖南利尔康生物股份有限公司，湖南岳阳414100)

纤维作物的生物脱胶 (例如苎麻脱胶)关键控制因素之一就是果胶酶[1]。果胶酶是一类能够降解果胶物质的生物酶的总称，是一种重要的工业酶制剂。果胶酶还广泛应用于果汁澄清、植物提取、废水处理、纸浆漂白[2]等工业领域。按照作用底物的不同，果胶酶可以分为果胶甲基半乳糖醛酸酶 (PMG)、聚半乳糖醛酸酶 (PG)、果胶裂解酶 (PL)、聚半乳糖醛酸裂解酶(PGL)、果胶酯酶或果胶甲酯酶 (PE)、原果胶酶等。按照酶作用的最适pH情况，又分为酸性果胶酶、中性果胶酶与碱性果胶酶。为适应工业化应用的高要求，果胶酶的研究热点正逐步由菌种筛选、酶学性质测定、分离纯化研究转向基因工程、蛋白质工程等分子生物学内容。发掘天然优秀菌株中的优质果胶酶基因，是分子生物学的基础工作之一。

实验室筛选到了拥有14个果胶酶基因的麻类脱胶高效菌株DCE01。为了更好的研究各果胶酶的特性，采用PCR技术克隆了该菌株的一个果胶酶基因Pel4I8，将其与大肠杆菌表达载体pET－28a连接，在E.coli BL21(DE3)中进行了表达。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

菌株DCE01由中国农业科学院麻类研究所工程酶项目组提供;E.coli BL21(DE3)购自Novagen公司;载体pET－28a购自TransGen公司;聚半乳糖醛酸钠、橘子果胶 (不同酯化度)购自Sigma公司;高保真聚合酶购自TransGen公司;UNIQ－10柱式细菌基因组等试剂盒购自上海生工公司;DNA Marker购自Tiangen公司;其他常规生化试剂均为分析纯，购自国药集团。……