王 旭 张志彬 杨 宏 贾芙蓉 张丽艳 荣继平(解放军第208医院神经内二科，吉林 长春 130062)

间充质干细胞(MSCs)有高度的自我复制和多向分化潜能，在一定条件下可分化为神经元样细胞。大量实验表明，MSCs移植能明显改善脑梗死患者的神经功能〔1〕。但具体经何种途径移植疗效更好尚无定论，本文对比动脉和静脉移植两种途径的疗效。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2010年1月至2012年10月本科住院治疗的脑梗死患者112例。纳入标准:①根据临床表现和头部CT、磁共振成像(MRI)确诊。均符合1995年全国第4届脑血管病会议制定的诊断标准〔2〕。②首次发病，发病时间20 d～1个月，病情稳定者。③患者知情同意，经医院伦理委员会批准。排除合并癫痫肿瘤等病例，无明显肝肾功能不全。男65例，女47例;年龄42～68〔平均(53.8±10.7)〕岁;随机分为动脉移植组和静脉移植组，每组56例。两组患者的年龄、性别构成比例、发病部位、病情轻重等差异均无显著性意义(P＞0.05)，具有可比性。末次发病至接受骨髓MSCsBMSCs时间为＜1个月，平均24.5 d。

1.2 干细胞提取方法 两组治疗前给予重组人粒细胞集落刺激因子150 μg皮下注射，1次/d，连用3～5 d，待血常规白细胞升高达(20～30)×109/L左右后可抽取自体骨髓200 ml。自体骨髓经干细胞分离试剂盒处理获取BMSCs。

医生在严格无菌状态下采用局麻通过骨穿抽取自体骨髓200 ml(枸橼酸钠抗凝)。在超净工作台内将自体骨髓加至干细胞提取专用试剂盒中，应用宁夏中联达生物有限公司的骨髓、脐带血处理试剂盒，经过去除红细胞，离心、提取、清洗等步骤，获得细胞悬液。然后采用流式细胞仪监测法，并进行计数。原则上在一定范围内一次干细胞的数量越多效果越好。但由于来源受限，本组病人一般每次细胞数在(1～2)×108个左右。

1.3 治疗方法 静脉组干细胞提取后直接用输血器回输，动脉组采用股动脉插管，数字减影血管照影(DSA)下介入寻找责任血管，将干细胞直接注射到病变血管。

1.4 功能测评 采用国际通用的美国国立卫生医院神经功能缺损评分(NIHSS)方法，于患者治疗前、治疗后1个月、3个月进行评定。

1.5 统计学方法 应用SPSS17.0软件进行分析，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验。

2 结果

2.1 两组治疗前后NIHSS评分比较 动脉组治疗后1、3个月NIHSS评分均低于静脉组(P＜0.05)。见表1。

2.2 不良反应 两组均未出现发热、栓塞等不良反应。

表1 两组治疗前后NIHSS的比较(±s，分)

表1 两组治疗前后NIHSS的比较(±s，分)

与治疗前比较:1)P＜0.05;与静脉组比较:2)P＜0.05

个月动脉组 25.29±1.27 10.24±2.631)2) 5.54±3.821)2)组别 治疗前 治疗后1个月 治疗后3静脉组 24.61±5.43 11.38±6.221) 7.23±3.411)

3 讨论

MSCs是具有多向分化潜能的成体干细胞。MSCs来源于中胚层间充质，主要存在于全身结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最丰富。MSCs具有可塑性和多向分化潜能。MSCs有以下特征:①有增殖能力。②在整个生命过程中具有自我维持或自我更新的能力。③能通过扩增祖细胞而产生大量的后代。④具有向多细胞系分化的能力。⑤取材方便，细胞来源比较充分。⑥能通过血脑屏障，可经过静脉或动脉移植。

关于MSCs移植治疗脑梗死的机制基本明确，首先是MSCs在一定的条件下，可经过诱导在体内和体外均可分化为神经元样细胞，并表达一些神经标志性蛋白如神经特异性烯醇化酶、Neurofilament-M〔3〕。Shahar等〔4～6〕移植人的 MSCs 能在大鼠体内存活增殖并迁移至脑梗死缺血病灶处，表达神经元或星形胶质细胞标志物，长期观察可明显改善大鼠的神经功能。MSCs在体内有治疗作用，关键是能分泌细胞因子和其他因子，特别是趋化因子，这些活性物质通过趋化损伤周围或远处的受体细胞，来调节细胞增殖分化功能，从而参与组织修复过程〔7〕。因此，两组干细胞移植治疗急性脑梗死在正常治疗结束后又均取得稳定疗效。本组MSCs来自于自体骨髓，来源较充分，提取方便，容易获得，不存在伦理道德问题。本组结果表明两组移植均取得较好疗效，且均未出现发热、栓塞等不良反应，考虑与采用输血器回输干细胞有关。动脉移植是采用介入疗法，经股动脉穿刺，在DSA影像下，将导管超选入病变血管，将MSCs缓慢注入，时间30 min左右。动脉移植能使局部干细胞浓度达到最高，定位精准，从而达到最大的治疗效果。干细胞在病灶局部生根发芽，不经过体循环，因经体循环后可能有一部分细胞会被机体的免疫系统清除，从而保证更大的存活率和增殖率。这也许是动脉移植优于静脉的原因。

1 孟宪国，朱士文，高 华，等.自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑梗死6个月随访〔J〕.中国组织工程研究与临床康复，2009;13(32):6374-8.

2 中华神经科学会，中华神经外科学会.各类脑血管疾病诊断要点〔J〕.中华神经科杂志，1996;29(6):379.

3 Woodbury D，Schwarz EJ，Prockop DJ，et al.Adult rat and human bone marrow stromal cells differentiate into neurons〔J〕.J Neurosci Res，2000;61(4):364-70.

4 Shahar T，Pace C，Henry RW.Epoxy platination of biological tissue:vis-Docta EP73 technique〔J〕.J Int Soc Plastination，2007;22:46-9.

5 Mahmood A，Lu D，Chopp M.Marrow stromal cell transplantation after traumatic brain injury promotes celluar proliferation within the brain〔J〕.Neurosurgery，2004;55(5):1185-93.

6 Tolar J，Le Blanc K，Keating A，et al.Concise review:hitting the right spot with mesenchymal stromal cells〔J〕.Stem Cells.2010;28(8):1446-55.

7 Hayase M，Kitada M，Wakao S，et al.Committed neural progenitor cells derived from genetically modified bone marrow stromal cells ameliorate deficits in a rat model of stroke〔J〕.J Cereb Blood Flow Metab，2009;29(8):1409-20.