耿　薇，曹　蕾，陈　燕

（咸阳师范学院化学与化工学院，陕西咸阳712000）

分析测试

柚子籽的脂肪酸组成与含量分析*

耿薇，曹蕾，陈燕

（咸阳师范学院化学与化工学院，陕西咸阳712000）

摘要：通过气相色谱-质谱联用（GC- MS）测定柚子籽中的脂肪酸含量，用外标法与峰面积归一法两种方法，进行对比定量分析。柚子籽脂肪酸种类丰富，以不饱和脂肪酸为主，柚子籽中不饱和脂肪酸为67.42%。柚子籽中4种脂肪酸含量：亚油酸＞棕榈酸＞油酸＞硬脂酸。

关键词：柚子籽；脂肪酸；气质联用；外标法；峰面积归一法中图分类号：O657.63

文献标识码：A

“果之美者,有云梦之柚”，早在2000多年前的《吕氏春秋》中就有记载。柚子，又称文旦、香栾，属芸香科常绿乔木，在我国有悠久的栽培历史。柚子的药用价值很高，《日华子本草》说它能“治妊娠人食少并口淡,去胃中恶气,去肠胃气。解酒毒,治饮酒人口气”。柚子有健脾胃、润肺、补血、清肠、利便、助消化的功效,可促进伤口愈合，对败血症有良好的疗效。此外,柚子的叶、皮、花、籽、根皆可入药。柚子籽含有多种药用活性成分，脂肪酸就是其中之一。脂肪酸是人体不可缺少的营养成分之一，与健康密切相关[1-3]。已有报道用气相色谱-质谱联用（GC- MS）的峰面积归一法分析柚子籽中的脂肪酸含量[4，5]，本文通过GC- MS的外标法与峰面积归一法两种方法分别测定柚子籽中的脂肪酸含量，并进行对比定量分析。

1　实验部分

1.1仪器和试剂

GCMS- QP2010气相色谱-质谱联用仪（日本岛津SHIMADZU制作所）；10μL微量进样器（澳大利亚SGE）；RE- 52AA旋转蒸发器（上海嘉鹏科技有限公司）；Sartorius CP124S电子天平（Max 120g，d = 0.1mg）；20～200μL移液器（Thermo Finnpipette）；SHB- IIIA循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；SB4200DTD超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；DF- 101S集热式恒温加热磁力搅拌器（河南省予华仪器有限公司）；HR7625飞利浦食品加工机，101型电热鼓风干燥箱（北京科伟永兴仪器有限公司）；索氏提取器；标准检验筛（40目，孔径0.45mm）。

柚子籽，正己烷，乙醚，甲醇，KOH，H2SO4，棕榈酸（A.R.西安化学试剂厂）；硬脂酸（A.R.天津化学试剂厂）；油酸（A.R.天津化学试剂厂）；亚油酸（99%，百灵威科技有限公司）。

所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

1.2分析条件

气相色谱条件：J&W DB- WAX弹性石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm）；载气为高纯He，纯度≥99.999%；柱温：130～240℃。柱初温130℃，保持1min，以20℃·min-1升温至230℃，保持5min，再以20℃·min-1升温至240℃，保持6.5min，共18.00min。进样口温度250℃；柱前压84.6kPa，柱流量1.00mL·min-1，分流比1 : 30；用微量进样器进样1.0μL。

质谱条件：EI离子源，离子源温度200℃，GC- MS接口温度200℃，电子能量70eV，电子倍增器电压0.97kV[4]，质量扫描范围29～450m·z-1，溶剂峰切除时间1.6min，质谱检测起测时间1.7min。

1.3柚子籽油的提取

将柚子籽烘干，粉碎，过40目筛。称取一定质量的样品，移入滤纸筒内，以乙醚作溶剂，采用索式提取器，30℃恒温水浴回流3h。倒出上清液，抽滤，将滤液在旋转蒸发仪上蒸去乙醚后，得到柚子籽油样品。

1.4峰面积归一法

样品的甲酯化：准确称量柚子籽油于50mL圆底烧瓶中，准确加入正己烷-乙醚（2∶1）溶液10.0mL，轻轻摇动使之溶解，再加0.5mol·L-1KOH-甲醇溶液6.0mL，振荡，60℃恒温水浴回流进行酯化反应20min。加水至25mL，振荡，静置，吸取上层脂肪酸甲酯，做GC- MS分析。

1.5外标法

1.5.1脂肪酸的甲酯化准确称量脂肪酸或样品于25mL比色管中，准确加入1%H2SO4-甲醇溶液2.0mL，于70℃水浴加热60min。再加正己烷定容至10mL，振荡，加水至25mL，振荡，静置24h，吸取上层脂肪酸甲酯，做GC- MS分析。

1.5.2脂肪酸标准溶液的配制选取常见的4种脂肪酸：棕榈酸，硬脂酸，油酸，亚油酸。准确称量4种脂肪酸的标准系列（7份）于25mL比色管中，按

1.5.1配制成标准溶液，做GC- MS分析。

2　结果与讨论

2.1峰面积归一法分析结果

图1为柚子籽中脂肪酸分析的GC- MS总离子流图，对GC- MS谱图进行鉴定和定量分析,应用SHIMADZUGCMSsolutionRelease2.10专业分析软件。

图1　柚子籽中脂肪酸分析的GC-MS总离子流图Fig.1 TIC of GC-MS of fatty acids from the grapefruit seed

成分鉴定根据GC- MS检测所得到的质谱信息，用质谱图计算机检索数据库NIST147数据库进行检索，通过与标准谱图对照以及质谱碎片对峰的分析，确定每一个组分的化学结构[4]。采用计算机检索与人工解析各峰相应的质谱图,用峰面积归一法测定了其相对含量,结果见表1。

表1　柚子籽中脂肪酸的组成Tab.1 Composition of fatty acids from the grapefruit seed

2.2外标法分析结果

2.2.1 4种脂肪酸的标准曲线图2为4种脂肪酸标准品的GC- MS总离子流图。

图2　 4种脂肪酸标准品的GC-MS总离子流图Fig.2 TIC of GC-MS of the four standard substance of fatty acids

绘制4种脂肪酸的标准曲线，得到标准曲线方程及相关系数见表2。

表2　 4种脂肪酸的标准曲线方程及相关系数Tab.2 The calibration curve equation and correlation coefficent of the four fatty acids

2.2.2样品分析结果

图3为柚子籽中脂肪酸分析的GC- MS总离子流图。

图3　柚子籽中脂肪酸分析的GC-MS总离子流图Fig.3 TIC of GC-MS of fatty acids from the grapefruit seed

柚子籽中4种脂肪酸的含量见表3。

表3　柚子籽中4种脂肪酸的含量Tab.3 Content of four fatty acids from the grapefruit seed

2.2.3回收率与精密度

准确称取样品（5份）于25mL比色管中，分别加入棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸标准品，按1.5.1配制溶液，做GC- MS分析。表4是样品中4种脂肪酸含量的回收率与精密度。

表4　 4种脂肪酸的回收率与精密度Tab.4 Recovery and precision of four fatty acids

3　结论

对比外标法与峰面积归一法两种方法分析柚子籽中的脂肪酸含量，峰面积归一法是相对定量，较简单易行，计算柚子籽中各脂肪酸的相对含量，柚子籽脂肪酸种类丰富，以不饱和脂肪酸为主，柚子籽中不饱和脂肪酸为67.42 %。外标法是绝对定量，需要标准样品，做标准曲线，准确度较高，柚子籽中4种脂肪酸含量：亚油酸＞棕榈酸＞油酸＞硬脂酸。

参考文献

［1］吴惠勤，黄晓兰，林晓珊，等.脂肪酸的色谱保留时间规律与质谱特征研究及其在食品分析中的应用［J］.分析化学，2007，35 （7）：998- 1003.

［2］魏永生，郑敏燕，耿薇，等.常用动、植物食用油中脂肪酸组成的分析［J］.食品科学，2012, 33（16）：188- 193.

［3］万益群，肖丽凤.超临界CO2萃取柚子种子油及脂肪酸的气相色谱分析［J］.分析科学学报，2007, 23（5）：559- 562.

［4］郑敏燕，宁坚刚，耿薇,等.气相色谱-质谱法研究柚子籽油脂的组成［J］.咸阳师范学院学报,2010,（2）.

［5］万益群，肖丽凤.柚子种子油的提取工艺及其脂肪酸的气相色谱法测定［J］.食品科学，2008，（3）.

DOI：10.16247/j.cnki.23-1171/tg 20150214

收稿日期：2014- 11- 04

基金项目：咸阳师范学院专项科研基金项目（12XSYK022）

作者简介：耿薇（1982-），女，硕士，工程师，主要从事分析测试方面的研究工作。

Fatty acid analysis of grapefruit seed by external standard method and peak area normalization method*

GENG Wei，CAO Lei，CHEN Yan

（School of Chemistry and Chemical Engineering, Xianyang Normal University, Xianyang 712000，China）

Abstract：This article analyzed the fatty acid in grapefruit seed by GC-MS，compared external standard method and peak area normalisation method to analyze quantitatively. There are different kinds of fatty acid in grapefruit seed. The main kind is unsaturated fatty acid，which is 67.42%. The content of the four fatty acids in grapefruit seed: linoleic acid＞palmitic acid＞oleic acid＞stearic acid.

Key words：grapefruit seed；fatty acid；GC-MS；external standard method；peak area normalization method