张珊珊，杜震生，陈 峰，苏 宁

(1.深圳市第二人民医院，广东 深圳518000，2.深圳市宝安区松岗人民医院，广东 深圳518105;3.广州中医药大学，广东 广州510405)

周围神经卡压是临床上多发、常见的损伤。显微外科手术能十分精确地解除卡压，为卡压神经的再生与修复提供基础。但如何保护卡压神经，最大程度地减轻继发性损害，重建神经传导，当前还无法很好解决。近年来，运用物理疗法治疗周围神经损伤已有报道［1-4］，但治疗机制仍不清楚，基于此，本课题采用经典Mackinnon［5］大鼠坐骨神经卡压模型，采用康复训练联合针刺疗法，通过对卡压神经CD34、VEGF 表达检测以及坐骨神经功能指数检测，分析康复训练联合针刺疗法对卡压周围神经微血管生成及功能修复的作用机制，为临床从神经微循环角度治疗神经损伤提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选用雄性清洁级SD 大鼠46 只(由广州中医药大学实验动物中心提供)，体质量230 ～250 g。

1.2 主要试剂

小鼠抗大鼠VEGF 单抗，SABC 免疫组化染色试剂盒，兔抗大鼠CD34 多克隆抗体，DAB 显色试剂盒，均出自武汉博士德生物技术有限公司。

1.3 主要仪器设备

显微手术器械:浙江宁波市成和显微器械厂;医用硅胶管:上海橡胶制品五厂;FS3013 德国目乐显微镜:德国麦迪塞姆仪器有限公司;图像采集系统:Image Pro Pluss 5. 01;G6805 型电针仪:上海医疗器械高科技公司。

1.4 动物模型制作

动物模型参照经典Mackinnon 大鼠坐骨神经卡压模型制作。模型实验动物于同一动物饲养室适宜环境下适应性饲养1 周。在梨状肌下缘10 mm 处，将内径1.0 mm、长6.0 mm 的一段硅胶管纵向切开后套在这段坐骨神经上，以7/0 无创线在8 倍手术显微镜下缝合硅胶管3 针。术后2 周，随机选6 只，沿原切口打开，卡压段神经经病理学证实为中、重度脱髓鞘改变，则造模成功。造模成功后，其余40 只大鼠仅去除硅胶管，卡压段神经外膜不加以松解。

1.5 动物分组

动物模型随机等分为4 组(n =10)。A 组(对照组):仅去除卡压;B 组(康复训练组):去除卡压后行康复训练;C 组(电针组):去除卡压后行电针治疗;D组(康复训练加电针组):去除卡压后行康复训练配合电针治疗。

1.6 治疗方法

1.6.1 康复训练 手术结束后第2 周开始康复训练，训练项目为游泳，每天1 次，第1 天10 min，每天增加3 min，直到手术结束后第3 周增至30 min，之后不再增加维持至实验结束取材为止。

1.6.2 电针治疗 电针治疗于去除卡压术后第2 天开始，在支架上固定，按实验针灸学穴位定位“足三里”和“环跳穴”，用华佗牌0.25 mm、13 mm 的针灸针进针6 mm，采用G6805 型电针仪，电针正极接在近心端，负极接在远心端，分别夹在“足三里”和“环跳”穴处的针柄上，双向规律电脉冲，宽度0.5 ms，频率2 Hz，穴位周围组织达到轻度颤抖即可。治疗时间为20 min，每天1 次，维持至手术结束后第3 周实验结束。

1.7 观察项目

1.7.1 整体状态 解除卡压手术结束后观测大鼠的肢体、伤口恢复情况。

1.7.2 坐骨神经功能指数(Sciatic nerve function index，SFI)测评 参照沈宁江、朱家恺［6］的方法，正常:SFI=0;完全损伤:-100;不完全损伤:-100 至0。测量时间为去除卡压手术结束后第22 天。

1.7.3 CD34、VEGF 检测 取卡压神经中段标本石蜡切片，采用免疫组化染色，用以判定CD34、VEGF 免疫组化水平表达程度。CD34、VEGF 染色成棕黄色至深棕色为阳性，神经微血管密度(MVD)计算参照Weidner［7］方法。

1.8 数据统计

数据均录入SPSS18.0 完成统计分析。所有计量资料均先进行单样本K-S 正态分布检验及方差齐性检验，属正态分布且方差齐的多组独立样本比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，如属于非正态分布或方差不齐的多组独立样本比较进行非参数检验(秩和检验)中K 个独立样本检验。P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 整体状态

两组大鼠均少数出现右爪皮肤溃疡，但D 组溃疡愈合程度好于B 组与C 组，A 组愈合程度最差;肌肉萎缩方面，D 组肌肉萎缩程度低于B 组与C 组，A 组肌肉萎缩最明显;打开切口均可见神经卡压处变细，质地变硬，与周围组织粘连，卡压处两端增粗，但D 组好于B 组与C 组，A 组最差。

2.2 坐骨神经功能指数(SFI)测评结果

表1 提示:B、C、D 组SFI 恢复程度均大于A 组，差异均有统计学意义(P ＜0.05);B、C、D 组之间比较，D 组SFI 恢复程度明显大于B 组与C 组，差异均有统计学意义(P ＜0.05)。

表1 各组大鼠SFI 比较 (±s)

表1 各组大鼠SFI 比较 (±s)

注:与A 组比较，①P ＜0.05;与B 组比较，②P ＜0.05;与C 组比较，③P ＜0.05。

组别 n SFI A 组10-28.74 ±4.00 B 组 10-21.27 ±3.80①C 组 10-21.58 ±3.65①D 组 10-15.93 ±2，68①②③

2.3 CD34 检测结果

表2 提示:B、C、D 组再生神经微血管数量明显高于A 组，差异均有统计学意义(P ＜0.05);B、C、D 组之间比较，D 组再生神经微血管数量明显高于B 组与C 组，差异均有统计学意义(P ＜0.05)。

表2 各组大鼠CD34 表达比较 (±s)

表2 各组大鼠CD34 表达比较 (±s)

注:与A 组比较，①P ＜0.05;与B 组比较，②P ＜0.05;与C 组比较，③P ＜0.05。

组别 n CD34 A 组10 27.99 ±3.92 B 组 10 33.65 ±3.04①C 组 10 32.16 ±3.50①D 组 10 37.39 ±4.54①②③

2.4 血管内皮生长因子(VEGF)检测结果

表3 提示:B、C、D 组VEGF 表达明显高于A 组，差异均有统计学意义(P ＜0.05);B、C、D 组之间比较，D 组VEGF 表达明显高于B 组与C 组，差异均有统计学意义(P ＜0.05)。

表3 各组大鼠VEGF 表达比较 (±s)

表3 各组大鼠VEGF 表达比较 (±s)

注:与A 组比较，①P ＜0.05;与B 组比较，②P ＜0.05;与C 组比较，③P ＜0.05。

组别 n VEGF A 组10 25.64 ±3.94 B 组 10 32.49 ±4.43①C 组 10 30.39 ±4.48①D 组 10 39.12 ±4.46①②③

3 讨论

CD34 是一种跨膜细胞表面糖蛋白，是小血管内皮细胞、内皮细胞祖细胞和造血祖细胞表面的标志［8］，常用CD34 标记新生血管，因其抗体是毛细血管的内皮细胞标记物［9］。

血管内皮生长因子(VEGF)是一种作用较强的血管生成因子和高度特异的促血管内皮有丝分裂因子，同时还是神经营养因子。Gupta 等［10］发现慢性受压神经内血管内皮生长因子及其受体蛋白增多，神经内血管数目会同时上升。在缺血性损伤情况下，Wang等［11］与Zachary［12］研究表明VEGF 能够大幅提高血管再生。

血液供应是神经再生与功能恢复的前提，众所周知，运动训练可改善血液供应，进而促进了神经再生与恢复［13-16］。大鼠运动疗法本实验采用游泳训练。一方面，水静压可以消除肿胀，促进肌肉恢复，进而促进靶器官神经功能;另一方面，浮力作用可使身体负荷减轻，从而减轻腿部疼痛，使运动变得更容易，更增强了运动疗效。多项研究显示，在治疗周围神经损伤、促进神经再生、恢复神经功能方面，电针有较明显优势［17-20］。

本研究表明电针联合康复训练能够有效促进大鼠卡压坐骨神经再生，同时促进神经功能恢复，这可能与神经内微血管再生有关。

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