徐铁柱，崔宇，杨超，王丽梅，李中堂，王俊可，赵致维，善亚君，柳晓兰，从玉文

小鼠小肠干细胞谱系追踪方法的建立及其在放射损伤中的应用

徐铁柱，崔宇，杨超，王丽梅，李中堂，王俊可，赵致维，善亚君，柳晓兰，从玉文

目的 利用Lgr5-EGFP-CreERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠建立谱系追踪方法，用于观察Lgr5+小肠干细胞在小肠组织更新中的作用，并研究辐射对小肠干细胞组织重建的影响。方法 通过基因型分析鉴定Lgr5-EGFP-CreERT2/ ROSA26-stop-EYFP小鼠。他莫西芬诱导小鼠体内的荧光蛋白表达，激光共聚焦显微镜观察诱导后小肠干细胞的分化。采用60Coγ射线(15Gy)照射Lgr5-EGFP-CreERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠，观察辐射对小肠干细胞组织重建的影响。结果 提取鼠尾DNA通过PCR方法鉴定Lgr5基因(174bp)，获得双阳性小鼠。他莫西芬(100mg/kg)单次诱导后，激光共聚焦观察到Lgr5+小肠干细胞在诱导后5d开始分裂，7d已到达绒毛顶端，14d少量绒毛全部带有荧光，45d更多的小肠绒毛中存在荧光细胞，而且更加稠密。但在15Gy照射后小鼠小肠绒毛脱落严重，隐窝处没有荧光出现。结论 成功建立了小肠干细胞谱系追踪模型，并初步观察了辐射对小肠干细胞损伤的影响。

小肠干细胞；谱系追踪；辐射损伤

在哺乳动物体内，小肠组织是自我更新速度最快的组织之一。整个小肠黏膜大概每3～5d更新一次，主要依赖于小肠干细胞的增殖与分化[1]。成体干细胞具有高度自我更新及多向分化能力[2]。以往对小肠干细胞的认识手段仅局限于使用多元同位素成像质谱分析法来研究DNA标记保留细胞[3]以及使用Musashi-1[4]和Prominin1[5]来研究隐窝柱状上皮细胞。……