夏光明，倪小红，王洲羿，黄虎翔，肖展翅，刘秋梅，李 钢

CD20作为跨膜的蛋白质是一种新型钙通道，CD20的激活是调节内源性钙离子变化的又一个影响因素，并通过钙离子变化直接调节钙离子通道活性。本研究采用大鼠局灶性脑缺血模型，用免疫组化和计算机图像分析技术检测局灶性脑缺血CD20的表达情况，初步探讨CD20在局灶性缺血脑组织中的变化。

1 材料与方法

1.1 动物及实验分组 雄性健康SD大鼠28只，体重200 g～250 g，由武汉大学实验动物中心提供。饲养室内温度25℃，自由进食。实验室温度25℃，实验前12 h禁食禁水。大鼠随机分为假手术组及大脑中动脉阻塞（MCAO）后3 h组、6 h组、24 h组。实验分批进行，每批含各组大鼠7只。

1.2 试剂与仪器 免疫组化试剂盒购自武汉谷歌生物技术有限公司。

1.3 动物模型的制作 大鼠用10%水合氯醛（35 mg／kg）腹腔注射麻醉。仰卧位固定，颈正中线左侧旁开约0.5 cm切口，沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，分离左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA），结扎颈外动脉远心端，用微动脉夹暂时夹闭CCA主干以及ICA入颅部。然后在ECA残端剪0.3 mm小口，将线拴插入，轻推尼龙线尾端经CCA分叉部沿ICA入颅，遇到阻力，大鼠呼吸心跳加快时停止。尼龙线插入深度从CCA分叉部计18.5 mm±0.5 mm。结扎ECA开口近心端，放开CCA动脉夹，缝合伤口，单笼饲养观察。参考Longa等［1］的方法进行动物清醒后爬行行为障碍评分：无神经功能缺失症状，活动正常者0分；提尾时病灶对侧前肢不能完全伸直者1分；爬行时出现向对侧转圈者2分；行走时身体向对侧倒者3分；……