张边江

摘 要：“探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化”实验中，酵母菌细胞的计数问题，在酵母菌种群生长曲线下降期取样计数包含了死亡的菌体，而曲线是活的酵母的变化曲线，因此，需要通过染色等技术区别酵母菌的死活。该文总结了多种染色和观察的方法，为中学生物实验教学提供参考。

关键词：酵母菌 染色 种群

中图分类号：P68 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2015）06（c）-0221-01

酵母菌为单细胞真核生物，在中学实验探究中作为实验材料被广泛的应用，如探究酵母菌的呼吸方式、探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化、酵母细胞的固定化技术等。探究培养液中酵母菌种群数量的变化常结合酵母菌的呼吸方式综合考查学生对知识的掌握情况，在有利于培养学生的科学探究的精神，考查学生的综合素质和严密的思维品质。

关于微生物计数、血细胞计数板问题、酵母菌种群数目统计实验中，教材交代不清楚，产生知识断层，导致在教学中教师和学生的误解。2011江苏高考生物卷第26题：（4）某同学在T3时取样，统计的酵母菌种群数量明显高于D点对应的数量，原因可能有“取样时培养液未摇匀，从底部取样”“未染色，统计的菌体数包含了死亡的菌体”“用血球计算板计数时出现错误”等。该题即考查了该知识断层，种群数量的变化的统计数目不包含死亡的菌体。该文讨论了酵母观察多种染色和观察的方法，为中学生物实验教学提供参考。

目前检测酵母细胞活性的常规方法有菌落计数法、美蓝染色法、流式细胞术、荧光染料染色等技术，可以检测酵母菌细胞的死活。表1为常用的几种区别酵母死活的方法原理及其结果。

红色箭头代表碘化丙啶染色的死酵母，绿色箭头代表二乙酸荧光素染色的活酵母。

采用FDA/PI双染色的技术能直观的区别死活酵母。碘化丙锭（PI）不能进入具有完整细胞膜的活细胞，当酵母细胞死亡或细胞膜不完整时，PI进入细胞，与DNA相结合，在488 nm的激光激发下，在波长660 nm左右检测到红色荧光。因此，通过FDA/PI双染色的方法，利用死活细胞在经染色后会激发出不同波长的荧光的特点，即活细胞可检测到FDA产生的荧光信号，而无PI产生的荧光信号，死细胞则相反，这样就可以将死活细胞区分开来（如图1所示）。

在中学酵母菌种群数量的动态变化的实验中，没有明确说明酵母种群生长曲线在下降期是活的酵母菌的数量曲线，而实验在同一个三角瓶中，取样进行酵母细胞血球计数板统计菌体数量的时候，需要染色或者在荧光显微镜下区别死、活酵母菌。该文总结了几种实验方法台盼蓝染色和美蓝的染色，需要的药品和器材不复杂，可以在中学实验中开展。

参考文献

[1] 肖安风，周祥山，周利，等.应用流式细胞术检测毕赤酵母的细胞活性[J].微生物学通，2006，33（6）：22-26.

[2] 秦亚平.“探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化”的分析和方案设计[J].生物学通报，2009，44（3）：35-36.