唐荣，王晓敏，严秀英

(抚州市疾病预防控制中心，江西 抚州344000)

流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，潜伏期短，传播速度快。流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型。A型流感病毒抗原性易发生变异，曾多次引起世界大流行[1]。人群对变异株普遍易感，防控难度加大。通过流感网络实验室对流感病毒进行监测分析可以了解毒株流行和变异情况，科学制定流感的防控策略。本文对2014年抚州市第一人民医院流感监测结果进行分析，了解本地区流感的流行特征。

1 材料与方法

1.1 标本来源 由国家级哨点医院抚州市第一人民医院采集发病3d以内的流感样病例[2](发热、体温≥38℃，伴咳嗽或咽痛之一者)的咽拭子标本共1068例。每周二、四送样。所有标本采集后4℃保存，并在48h内运送至抚州市疾控中心流感实验室进行病毒核酸检测及毒株分离。未能及时检测的标本放-70℃保存。

1.2 细胞株 狗肾传代细胞(MDCK)由江西省疾病预防控制中心疾检所提供，本实验室液氮保存。

1.3 主要仪器与试剂 Promega Maxwell 16核酸纯化扩增仪及配套试剂盒，Bio-Rad CFX-96荧光

PCR仪，江苏硕世流感检测试剂盒，国家流感中心血凝和血凝抑制试验标准抗体。所有试剂和耗材均在有效期内使用。

1.4 实验方法

1.4.1 核酸检测 所有标本用Promega核酸纯化仪提取病毒RNA，实时荧光定量PCR先进行流感病毒A、B型核酸检测，对A型阳性标本再进行新甲H1N1、 季节性 H3N2 和禽流感 H5、H7、H9、N9 检测。对B型流感阳性进行B-Yamagata(BY)和BVictoria(BV)检测。每次实验均设立阳性对照和阴性对照。

1.4.2 病毒分离培养和鉴定 选择生长良好的对数生长期MDCK细胞消化传代，80%~90%成片生长时用于病毒分离。收集细胞病变液用HA和HI进行分型鉴定。

1.5 统计分析 使用SPSS 13.0统计分析，组间比对采用卡方检验，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 流感病毒核酸检测结果 2014年共采集并检测流感样咽拭子标本1068例，阳性201例，核酸检测阳性率为18.82%(201/1068)。其中新甲H1N1 35 例(17.42%)，季节性 H3N2 97 例(48.25%)，BY 69例(34.33%)。新甲NIN1仅出现在春季，夏季以季节性H3N2为主，11-12月份只有BY流行。阳性率最高的是1、3和7月份。各月病原学监测结果见表1。

2.2 不同性别流感核酸检测情况 1068例咽拭子标本中男性640例，女性428例，男女比例为1.51：1。流感病毒核酸检出阳性男性组为121例(60.20%)，女性组为80例(39.80%)。尚未发现男女两组间流感核酸阳性检出率有统计学差异 (χ2=0.008，P>0.05)。

表1 抚州市2014年流感核酸检测和病毒分离表

2.3 不同年龄流感核酸检测情况 1068例流感监测样本中，年龄最小的1个月，最大的87岁。核酸阳性率最高的是≥15岁年龄组51.79%(58/112)，其次为≥60岁年龄组29.31%(17/58)。不同年龄组流感监测结果见表2。各年龄组流感病毒阳性分离率差异有统计学意义。 (χ2=121.73，P<0.05)。

表2 2014年抚州市流感核酸检测年龄分布表

2.4 流感病毒分离情况 流感病毒核酸阳性样本进行MDCK分离鉴定，共分离毒株63例，阳性分离率为5.90%(63/1068)。其中新甲H1N1 12例，占全年阳性毒株总数的19.05%；季节性H3N2 16例，占25.40%；BY 35例，占55.55%，以BY分离数量最多。1、3和7月份病毒毒株分离数较多，1月份以新甲HIN1和H3N2为主，3月份以BY为主，7月份以H3N2为主。病毒分离数量与核酸阳性检出率相一致。流感病毒分离情况见表1。

3 讨论

流感病毒包膜上主要有植物血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)二种抗原，抗原变异形成新的亚型容易造成广泛流行[3]。流感病毒是全球监测性传染病，是预防和控制流感的主要措施之一[4]。抚州市2014年流感监测样本采用实时荧光定量RT-PCR方法检测。流感病毒核酸检测结果显示全年各个月份均有阳性样本的检出。2014年抚州市有多种流感亚型在人群中流行，检出的病毒型别主要有新甲H1N1、季节性H3N2和BY，未检出BV，与本省其他地区过去十年优势流行株有较大不同[5，6]。通过监测我们发现2014年抚州市流感流行主要集中在春季1至3月份和夏季7、8月份。1至3月份有新甲H1N1、季节性H3N2和BY同时流行，4至12月份没有出现过新甲H1N1型。4至10月以季节性H3N2为主，伴有少量BY，到11、12月份只有BY流行。我国北方城市流感一般在冬春季节流行[7-9]，我市夏季7月份出现的季H3N2流行高峰，这与我国南方城市夏季是主要流行季节的观点相一致[10-12]。从以上结果可以看出，抚州市2014年流感流行主要在春季和夏季，没有出现冬季高发的流行特征，与本省其他地区流感流行特征也存在差异[13,14]。从流感病毒核酸检测阳性样本的年龄分析我们发现各个年龄组流感核酸均检出阳性标本。核酸阳性率最高的是≥15岁年龄组，占到51.7 9%，此人群多以学生为主。校内密切接触和空气传播是其主要因素，极易造成学生之间的广泛流行。这与庞晶晶[15,16]等的报告不一致。其次为≥60岁年龄组，占29.31%，此组老年人普遍抵抗力降低，更易感染流感病毒。对不同性别流感核酸检测我们尚未发现男女两组间流感核酸阳性检出率有统计学差异,这与江西省近几年的分析结果相一致[6]。

对流感病毒核酸检测阳性的样本进行病毒分离，全年共分离出流感毒株63例，分离率为5.90%。全年分离出毒株最多的是BY，占全年阳性毒株总数的55.55%。我市从6月到8月份流感病毒分离数下降，这可能与夏季天气炎热，样本保存和运输等条件有关。流感病毒分离率与流感发病率、采样液、采集方法、样本的运送和保存以及分离技术等密切相关，各个环节共同影响流感毒株分离的效果。我们也将在以后的工作中重点从这几个方面入手，严格操作程序，提高病毒分离率。

[1]郭元古,程小雯.流行性感冒病毒及实验技术[M].北京:中国三峡出版社,1997:122.

[2]卫生部.全国流感监测方案(2010年版)[S].北京:卫生部.2010.

[3]Mullooly JP,Bridges CB,Thompson WW,et al.Influenza and RSV associated hospitalization among adults[J].Vaccine,2007,25(5):846-855.

[4]朱玉芝,杨明,苏杨.流感病毒快速检测分离鉴定新技术的应用[J].中国公共卫生管理,2006,22(3):233-234.

[5]邹明霞,谢昀,曾艳文,等.江西省2006-2008年流感监测哨点医院病原学监测结果分析[J].现代预防医学,2010,37(23):4408-4410.

[6]周珺,熊英,李健雄,等.2009年-2012年江西省流感病原学监测结果分析[J].中国卫生检验杂志,2014,24(12):1771,1775.

[7]高燕,方立群,张勇,等.中国大陆季节性流感活动的空间分布特征[J].中华流行病学杂志,2010,30(11):1097-1101.

[8]黄芳,郭娟,崔淑娟,等.北京市甲型H1N1流感病毒病原学监测分析[J].中华流行病学杂志,2010,30(5):494-496.

[9]乔凤娟,刘红.长春市2011-2013年流感监测情况分析[J].中国卫生工程学，2014,13(1):69-72.

[10]沈方正.流感病毒变异与流行性感冒流行与预防[J].上海预防医学,2005,17(12):561,567.

[11］熊英,邹明霞,谢昀,等.2004年江西省流行性感冒病原学监测结果分析[J].中国卫生检验杂志,2005,15(9):1103,1108.

[12]邹明霞,谢昀,熊英,等.2004-2007年江西省流行性感冒监测哨点医院病原学监测结果分析[J].疾病监测,2009,24(7):484-486.

[13]陈玉红,魏维杰,黄秋艳.宜春市 2013年流感病毒检测结果分析[J].实验与检验医学,2014,32(6):793-794.

[14]邓兰,李晶鑫,钟知情.2009年至 2013年萍乡市流感病例样本real-time RT-PCR结果分析 [J].实验与检验医学,2014,32(5):511-512.

[15]庞晶晶,路燕,胡三梅,等.2013年北京市中心城区流感病原学特征[J].首都公共卫生,2014,(8):158-161.

[16]谢晓红,陶力新,王仁刚.上海市奉贤区2010年流感监测情况分析[J].中国卫生检验杂志,2012,22(2):326-327.