靖春旭 赵菲 姚瑞英 沈延平 任虹

4714例无偿献血者A1抗原检测分析

靖春旭 赵菲 姚瑞英 沈延平 任虹

目的 调查南阳市A型、AB型(ABO正反定型相符)无偿献血者红细胞A1抗原阳性率和阳性凝集强度。方法 采用96孔微孔板法对3530例A型、1184例AB型(ABO正反定型相符)无偿献血者标本进行A1抗原筛查；对检出的弱阳性和阴性标本使用试管法进行确认。结.3530例A型与1184例AB型无偿献血者A1抗原阳性率分别为99.12%(3499/3530).97.72%(1157/1184)。A型无偿献血者A1抗原阳性率高于AB型无偿献血者(χ2=14.35, P＜0.01)。A1抗原在A型无偿献血者中的凝集强度大于AB型(χ2=428.92, P＜0.01)。结论 ABO正反定型相符的A型和AB型中存在一定低比例的ABO亚型, 有必要对这一部分献血者和用血者进行A1抗原的检测, 以保证输血安全, 提高输血疗效。

A1抗原；ABO血型；正反定型相符；凝集强度

ABO血型系统是由奥地利病理学家、免疫学家Karl Landsteiner 在1900年通过“棋盘法”发现的, 由于ABO血型抗原的强度是所有人类血型系统中免疫原性最强的, 所以ABO血型系统对临床输血至关重要。E.von邓格恩和L.希尔斯费尔德在1911年最先注意到有些A抗原较正常红细胞表达弱, 从而认识到A亚型的存在, Landsteiner和Levine将两种主要的亚型命名为A1和A2［1］。A2(A2B)亚型的特点是红细胞表面只有A(AB)抗原, 缺乏A1抗原；ABO正反定型是抗-A强凝集, 大部分血清中无抗-A1, 仅少数血清中存在少量抗-A1。因此大部分A2和A2B亚型在常规血型检测中因其ABO正反定型相符而被漏检, 本次研究对本地区A型和AB型(ABO正反定型相符)无偿献血者行A1抗原检测, 分析A1抗原的阳性率和凝集强度, 现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 来源南阳市2014年6～10月3530例A型和1184例AB型(ABO正反定型相符)无偿献血者共4714例。所有标本采用EDTA-K2抗凝。

1.2 仪器与试剂 Metis全自动血库系统(深圳爱康)、96孔微孔板(深圳爱康)、TD5B平板离心机(长沙湘智)、KA-2200型离心机(日本久保田)、震荡仪(深圳爱康)、加样枪(Eppendor.10～100 μl)、一次性玻璃试管(泰州科健)、一次性塑料滴管。人ABO反定型用红细胞(北京金豪)、 抗A抗B血型定型试剂(单克隆抗体)、抗-A1凝集素、抗-H(均为上海血液生物医药有限公司)、人源抗A抗B试剂、成人ABO红细胞(均为实验室自制)、生理盐水(河南华利制药公司)。仪器设备经过校验合格, 按照实验室标准操作规程进行日常使用和维护。所有试剂均经过批批检, 在有效期内使用。

1.3 方法

1.3.1 A1抗原筛查 采用96孔微孔板法, 操作步骤如下：①挑选检测结果为A型和AB型的标本(ABO正反定型相符),使用ABO正反定型检测时使用的预稀释板(9 μl压积红细胞+300 μl生理盐水)孔内的红细胞悬液。②取另一干净96孔微孔板, 每孔加30 μl 抗-A1凝集素和30 μl 红细胞悬液；同时设置阴性对照(30 μl 抗-A1凝集素和30 μl O型红细胞悬液)和阳性对照(30 μl 抗-A1凝集素和30 μl A1细胞悬液)。轻轻振荡混匀。③使用平板离心机2000 rpm 离心60 s。④振荡先1550 rpm 振荡25 s；再430 rpm 振荡100 s。⑤观察结果,将强凝集的标本凝集强度记录为3+～4+；将弱凝集和阴性标本使用试管法重新检测, 记录试验结果。

1.3.2 A1抗原确认 采用试管法, 操作步骤如下：①挑选微板法弱凝集和阴性的标本, 使用生理盐水洗涤红细胞3次,配制成3%～5%的红细胞悬液备用。②取1支干净试管, 分别加入1滴抗-A1凝集素和1滴红细胞悬液, 同时设置阴性和阳性对照。轻轻混匀。③3400 rpm 离心15 s。④观察并记录试验结果。

1.3.3 ABO血型试管法确认 采用经典试管法［2］对检出的A1抗原阴性的标本进行ABO正反定型确认及H抗原检测。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差±s)表示, 采用t检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. .2014年6～10月对4714例检测结果为A型和AB型(正反相符)的标本进行A1抗原检测。检测结果见表1, 表2。

表 A1抗原检测结果分析(n, %)

表 A1抗原阳性标本凝集强度分布情况(n)

2.2 对31例A1抗原阴性A型的标本进行ABO血型试管法确认, 其A抗原凝集强度均为4+, H抗原凝集强度为2+～3+。对27例A1抗原阴性ABO血型检测结果为AB型的标本进行ABO血型试管法确认, 其A抗原和B抗原凝集强度均为4+, H抗原凝集强度为2+～3+。

3 讨论

从表1可见, A型和AB型的红细胞上均存在一定低比例的A1抗原不表达或低表达, 故A抗原凝集强度正常且ABO正反定型相符的标本不能排除A亚型(或A亚型B)。本次调查3530例A型和1184例AB型无偿献血者,其A1抗原阳性的比例分别为99.12%(3499/3530)和97.72% (1157/1184), A型红细胞上A1抗原的阳性率高于AB型红细胞(χ2=14.35, P＜0.01), 提示本地区A抗原凝集强度正常且ABO正反定型相符的AB型无偿献血者的亚型的比例高于A型无偿献血者。

本次研究所使用的抗-A1凝集素是双花扁豆外源性凝集素, 在合适的浓度下, 这种外源性凝集素可以非常容易的将A1和A1B细胞与A2和A2B细胞区分开。Rochant等［2］研究发现, 多数A2个体的红细胞与荧光标记的双花扁豆凝集素反应表现很弱的荧光, 但少数细胞表现很强的荧光；相反地, 绝大多数A1个体的红细胞表现很强的荧光信号, 仅10%的细胞表现弱的荧光信号, 这可以解释当使用抗-A1凝集素时出现的混合视野外观。本次研究也发现, 当抗-A1检测进行多次离心时, 出现了混合视野外观, 因此, 咨询试剂厂家后, 采用试管法立即离心结果为标准进行结果判断, 将不凝集的标本判定为A2或A2B, 将凝集强度介于±～2+的标本判定为Aint或AintB。

从表2可以看出, A2B亚型无偿献血者中A1抗原凝集强度明显弱于A2亚型(P＜0.01)。研究显示, A1和A2来源的N-乙酰氨基半乳糖转移酶特异性相同, 对低分子质量的受体具有相同的异质性, 均合成同样的A决定簇［3］。A基因和B基因编码不同的糖基转移酶, 催化不同的糖基转移酶到H抗原末端半乳糖基上, 形成相应的A或B抗原, 两种不同的糖基转移酶竞争共同的受体物质, 由于等位基因的竞争作用, 因此A1抗原在A2B亚型红细胞表面的表达明显弱于A2亚型［4］。

本次研究无偿献血者A型和AB型(ABO正反相符)中A2亚型和A2B亚型, 显示人群中存在一定低比例的A2和A2B亚型, 因其常规检测时ABO正反定型一致常被漏检。研究表明, A1和A2抗原决定簇不仅存数量上的差异, 同样还存在质的区别［5,6］。在A2和A2B亚型作为供血者时, 只要其血清中不含有抗-A1抗体, 作为正常A型和AB型发往临床输注给A型和AB型患者, 不会引起溶血性输血反应；而A2和A2B亚型患者被漏检, 作为正常A型和AB型输注A型和AB型红细胞时, 供者红细胞A1抗原可刺激患者产生免疫反应, 产生针对A2抗原缺失位点的抗-A1抗体, 当患者再次输注A型或AB型红细胞时, 就可能发生严重的溶血性输血反应［7］。但是关于A2和A2B亚型患者输注A型和AB型红细胞产生抗-A1抗体的几率, 输注红细胞次数与抗-A1抗体产生频率的关系等, 本次研究由于时间和条件的限制还没有临床数据, 有待于进一步研究。

［1］ 杰夫·丹尼尔. 人类血型. 朱自严, 译. 北京: 科学出版社.2007.8-79.

［2］ Rochant H, Tonthat H, Henri A, et al. Abnormal distribution of erythrocytes A1 antigens in preleukemia as demonstrated by an immunonuorescence techniclue. Blood Cells.1976(2):237-255.

［3］ Watkins WM. Biochemistry and Genetics of the ABO, Lewis, and P blood group systems. Adv Hum Genet.1980(10):1-136.

［4］ Gutzwiller F, Dedeine F, Kaiser W, et al. Correlation between the green-island phenotype and Wolbachia infections during the evolutionary diversification of Gracillariidae leaf-mining moths. Ecol Evol.2015.5(18):4049-4062.

［5］ Monfort M, Honoré P, Gothot A, et al. Simultaneous passenger lymphocyte syndrome and multiple alloimmunization against donor’s blood group antigens after liver transplantation. Vox Sang.2015.109(1):86-90.

［6］ Eksteen M, Tiller H, Averina M, et al. Characterization of a human platelet antigen-1a-specific monoclonal antibody derived from a B cell from a woman alloimmunized in pregnancy. J Immunol.2015.194(12):5751-5760.

［7］ 种靖慧, 闫莉娜, 李彤彤, 等. A201亚型患者输注A型血致配血不合1例.检验医学与临床.2013.10(10):1337-1338.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.35.045

2015-08-19］

南阳市2014年科技攻关项目(项目编号：2014GG029)

473000 河南南阳市中心血站