夏 迪，钱 倩，刘志成，谭鸣鸣，丁 媛，苏 欣，孙文逵，施 毅

0 引 言

树突状细胞相关C 型凝集素-1(dendritic cellassociated C-type lectin-1，Dectin-1)是重要的模式识别受体，由CLEC7A 基因编码，广泛表达于树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞等多种细胞表面，在肺、肠、胸腺和脾脏等器官中表达量高，提示其在免疫监视和免疫防御中具有重要作用。Dectin-1受体通过识别真菌细胞壁的β-葡聚糖，介导宿主细胞对真菌的黏附和吞噬，启动宿主抗真菌天然免疫［1－2］。此外，Dectin-1 能够通过调节Th1 和Th17细胞的分化来调节获得性免疫［3］。研究发现，受到真菌病原体刺激时，宿主细胞Dectin-1 表达量显著增加［4］，而Dectin-1 基因敲除小鼠感染烟曲霉时，组织真菌负荷显著增加［5］。因此，本研究设想使Dectin-1在静息状态下高表达，极可能增强宿主对真菌感染的抵抗力，为真菌感染防治提供新的思路。

小鼠Dectin-1 基因又名CLEC7A，位于6 号染色体上，含有6 个外显子区，属于C-型凝集素结构域家族7。本研究构建的重组腺病毒包含的目的基因为6 个外显子中的CDS 区，全长735 bp，通过构建表达Dectin-1 基因的重组腺病毒，进行鉴定及纯化，为后续体内外实验研究Dectin-1 高表达在抗真菌免疫中的作用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料 pMD19T simple-CLEC7A 载体、pIRES2-EGFP 载体、中间载体pDONR221、腺病毒骨架载体pAD/CMV/V5-DEST 由上海锐赛生物技术有限公司构建和提供;E.coli 感受态细胞DH5a 和人胚肾293(HEK293)细胞由本实验室提供;限制性内切酶NheⅠ、BamHⅠ、PacⅠ、DNA 连接酶购自Fermentas公司;RNA 提取试剂Trizol、逆转录试剂盒、实时荧光定量PCR 试剂盒、病毒载体重组酶购自Invitrogen公司;胶回收试剂盒、质粒抽提试剂盒、基因组DNA抽提试剂盒购自Axygen 公司;Lipofectamine 2000试剂、DMEM 培养基、胎牛血清、胰酶购自Hyclone公司;其余试剂为国产分析纯。……