李睿

（青岛市市立医院超声科，山东 青岛 266011）

乳癌是世界范围内严重危害妇女健康的恶性肿瘤，其发生和发展受多种风险因素的影响，与许多基因和蛋白质的表达密切相关。近几年来，全基因组关联分析迅猛开展。EASTON等［1］的研究结果显示，TNRC9基因与乳癌有较强的关联性。本文主要研究了乳癌TNRC9基因及有关因素对乳癌发病风险的影响，以期为乳癌的病因研究及高危人群的基因筛查提供理论依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

2005年6月—2014年1月，收集于我院就诊乳癌病人375例及健康对照382例，采集两组基本信息，包括年龄、月经初潮年龄、绝经年龄、生育史、哺乳情况和既往史。调查员为我科住院医师，对研究对象进行问询调查，所得资料双份核对并录入Excel表格。研究对象均知情同意，并提供血液样本。

1.2 TNRC9rs12443621基因型检测

根据GenBank dbSNP数据库中的TNRC9基因rs12443621设计引物和TaqMan－MGB探针，进行单核苷酸多态性（SNP）检测。PCR反应体积为25μL，其中 DNA模板约5μL、2×TaqMan Universal PCR Master Mix 10μL（美国ABI公司）、引物各0.5μL、探针各0.5μL。反应在 Real－PCR扩增仪（美国BioRad公司）上进行。扩增参数：94℃预变性5min；94℃变性15s，60℃退火1min，共45个循环。反应结束后确认扩增曲线并由仪器自动进行SNP基因分型读取。判断标准：纯合基因型1，FAM染料扩增可见明显扩增信号，VIC染料无扩增信号；纯合基因型2，VIC染料扩增可见明显信号，FAM染料无扩增信号；杂和基因型，两种染料均可见明显信号。

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 两组基本资料比较

两组年龄差异无显著性（P＞0.05）。病例组的初潮年龄小于对照组（t＝1.71，P＜0.05），而两组绝经年龄差异无显著性（P＞0.05）。与对照组比较，病例组哺乳时间短，分娩次数多，无母乳喂养史及无生育史者所占比例高（t＝9.43，χ2＝9.58～18.73，P＜0.05）。两组流产史、流产次数比较差异无显著性（P＞0.05）。见表1。

2.2 TNRC9rs12443621基因型与乳癌易感性分析

两组TNRC9rs12443621的基因型分布及等位基因频率差异均无统计学意义（P＞0.05）。TNRC9 rs12443621基因型与乳癌患病风险无关。见表2、3。将病例组按绝经情况、有无哺乳史和生育史进一步分层分析，以等位基因纯合子AA基因型为参照，AG＋GG基因型分布在各病例组间差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

表1 两组基本资料比较（）

表1 两组基本资料比较（）

组别 n 年龄（岁）初潮年龄（岁）绝经年龄（岁）哺乳时间（月）母乳喂养史（例（χ／%）） 生育史（例（χ／%））无有无有对照组 382 49.91±4.02 15.02±1.99 49.07±3.56 14.56±11.71 50（13.09） 332（86.91） 13（3.40） 369（96.60）病例组 375 50.35±3.89 14.68±2.56 51.56±3.24 8.75± 7.64 81（21.60） 294（78.40） 34（9.97） 341（90.93）组别 n 分娩次数0 1～2 ≥3流产史（例（χ／%））无有流产次数0 1～2 ≥3对照组 382 16（4.19） 361（94.50） 5（1.31） 112（29.32） 270（70.68） 112（29.32） 214（56.02） 56（14.66）病例组 375 34（9.07） 320（85.33） 21（5.60） 123（32.80） 252（67.20） 123（32.80） 218（58.13） 34（8.53）

表2 两组TNRC9rs12443621基因型分布及等位基因频率比较

表3 TNRC9rs12443621基因型与乳癌患病风险的多因素Logistic回归分析

表4 TNRC9rs12443621基因型与乳癌患病风险的分层分析

3 讨 论

国内外许多研究探讨了年龄、生育因素等与乳癌的关系，但所得结论并不完全相同［2－9］。本研究结果显示，无生育史、月经初潮年龄早为乳癌的危险因素，而哺乳时间长、初潮年龄晚、分娩次数多则为保护因素，这与多个研究结果一致［2－5］。月经初潮年龄早增加乳癌的患病风险可能与机体长时间处于较高水平性激素的环境中有关。分娩次数多、哺乳时间长的有利作用可能与经产妇乳腺组织的增殖减弱、孕期激素水平的改变有关［10－11］。因此，生育和母乳喂养对预防乳癌的发生具有一定的作用。本研究未显示绝经年龄、流产史与乳癌的发病有关，这与国内一些研究结果不一致［3－5］。乳癌的发病受遗传、环境、生活方式、卫生条件、饮食等的影响，而这些因素的地域差异可能导致国内外甚至国内不同地区的研究结果不完全相同。

TNRC9基因含有3个核苷酸重复基序和1个假定基因LOC643714，rs12443621位于TNRC9基因的5′－端连锁不平衡区。EASTON等［1］用全基因组扫描技术进行病例对照研究，结果显示，TNRC9 rs12443621的SNP与乳癌发病有很强的相关性。WOOLCOTT等［12］研究显示，该基因通过改变乳腺腺体的纤维密度而影响乳癌发生风险。最近的研究还显示，该基因与乳癌的临床预后和5年生存率关系密切［13］。国内LIANG等［14］的研究结果表明，rs12443621与雌激素受体阳性的乳癌发病相关。但ZHENG等［15］的研究结果显示，rs12443621位点与中国汉族女性乳癌发生不相关，这与本研究结果是一致的。本研究进一步分层分析，也未显示TNRC9rs12443621与乳癌的相关危险因素有相关性。国内外研究结论不一致的原因可能是由种族差异或者所选样本的肿瘤特异性造成的，今后需要增大样本量、设计更为严格的实验来验证该基因位点对乳癌的作用。

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