张娜，项锋钢

（1 青岛大学医学院病理学教研室，山东 青岛 266021； 2 中国人民解放军第148医院妇产科； 3 青岛大学附属医院病理科）

子宫内膜癌是女性生殖系统常见的三大恶性肿瘤之一，占女性生殖系统恶性肿瘤的20%～30%，其中以起源于子宫内膜腺体的腺癌（子宫内膜样腺癌）最常见。近年来子宫内膜癌的发病率呈上升趋势，其发病机制目前仍不十分明了。研究原癌基因的激活、抑癌基因的失活是目前肿瘤研究的热点。本实验通过免疫组化SP法检测子宫内膜样腺癌及非典型性增生子宫内膜、单纯性增生子宫内膜、正常子宫内膜组织中FHIT蛋白、Survivin蛋白的表达情况，探讨它们与子宫内膜样腺癌的临床病理参数之间的关系。

1 材料与方法

1.1 材料及其来源

2008年1月—2011年10月，中国人民解放军第148医院手术后经病理确诊的子宫内膜样腺癌组织60例、不典型性增生子宫内膜20例、单纯性增生子宫内膜20例，以及因宫颈病变及子宫脱垂等行子宫切除的正常子宫内膜20例。所选病例临床资料均完整，病人术前均未接受化学药物、放射治疗或相关激素治疗。子宫内膜样腺癌病人60例，年龄29～71岁，平均55.8岁。病理分化程度：G1级20例，G2级21例，G3级19例。所有病例均行手术治疗，其手术病理分期为Ⅰ期21例，Ⅱ期19例，Ⅲ期20例。其中淋巴结有转移者19例。

1.2 试剂与方法

免疫组化染色采用SP法。兔抗人FHIT多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，抗体工作浓度为1∶150。鼠抗人Survivin单克隆抗体（SD79）购自广州深达生物制品技术有限公司，抗体工作浓度为1∶40，超敏SP广谱免疫组化试剂盒、DAB酶底物显色剂等均购自广州深达生物制品技术有限公司。所有标本经40g／L中性甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，厚度为4μm。按SP试剂盒说明书要求进行操作，在22℃室温下孵育1h，采用pH值9.0的EDTA修复液进行高温高压修复后，采用SP法进行免疫组化染色。以已知阳性标本作为阳性对照，以正常羊血清代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判断方法和标准

细胞浆或核内出现棕黄色颗粒即为FHIT蛋白、Survivin蛋白的阳性表达［1］。参照有关文献采用半定量积分法判定结果。按照染色强度评分：0分（无色），1分（浅黄色），2分（棕黄色），3分（棕褐色）；按照阳性细胞数占百分比计分：以阳性细胞＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分；以两者积分的乘积表达阳性等级：0～4分为阴性（－），5～8分为弱阳性（＋），9～12分为强阳性（）［1－2］。

1.4 统计学处理

采用SPSS 19.0软件系统进行统计处理，以秩和检验对有序资料进行分析，相关指标应用Spearman等级相关分析。以P＜0.05为有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同子宫内膜组织FHIT蛋白与Survivin蛋白表达

FHIT蛋白的阳性表达率在子宫内膜样腺癌、不典型性增生子宫内膜、单纯性增生子宫内膜、正常子宫内膜组织中分别为 51.7%、85.0%、90.0% 和100.0%，与上述其他3种类型子宫内膜组织相比，癌组织中的FHIT蛋白阳性表达率明显降低，差异具有显著性（Hc＝19.048，P＜0.001）。子宫内膜样腺癌、不典型性增生子宫内膜、单纯性增生子宫内膜、正常子宫内膜组织Survivin蛋白的阳性表达率分别为73.3%、70.0%、35.0%、15.0%，与上述其他3种类型子宫内膜组织相比，癌组织中的Survivin蛋白阳性表达率明显升高，差异具有统计学意义（Hc＝28.241，P＜0.001）。见表1。

2.2 FHIT蛋白表达与子宫内膜样腺癌病理参数的关系

本文研究结果显示，FHIT蛋白阳性表达率随着肿瘤分化程度的降低、临床病理分期的进展、肌层侵犯深度的增加以及淋巴结转移的出现而明显降低（Hc＝18.435～24.443，P＜0.01），FHIT蛋白阳性表达率与病人的年龄、是否绝经及大体类型均无相关性（Hc＝0.494～1.878，P＞0.05）。见表2。

表1 不同类型子宫内膜组织中FHIT与Survivin蛋白的表达（例）

表2 FHIT蛋白表达与子宫内膜样腺癌病理参数关系（例）

2.3 Survivin蛋白表达与子宫内膜样腺癌病理参数关系

本研究结果显示，子宫内膜样腺癌组织中Survivin蛋白的阳性表达率随着肿瘤分化程度的降低、临床病理分期的增加、肌层浸润深度的加深以及淋巴结的转移而明显增高（Hc＝11.114～41.560，P＜0.01），Survivin蛋白的阳性表达率与病人的年龄、是否绝经及大体类型均无相关性（Hc＝0.264～0.438，P＞0.05）。见表3。

2.4 子宫内膜样腺癌组织FHIT蛋白与Survivin蛋白表达相关性

子宫内膜样腺癌60例中，FHIT蛋白阳性表达31例，其中Survivin蛋白阳性表达18例，阴性表达13例；FHIT蛋白阴性表达29例，其中Survivin蛋白阴性表达3例，阳性表达26例；二者表达呈负相关（r＝－0.336，P＜0.01）。

表3 Survivin蛋白表达与子宫内膜样腺癌病理参数关系

3 讨 论

3.1 FHIT蛋白在子宫内膜样腺癌组织表达及其临床意义

FHIT是近期新发现的抑癌基因，它与多种恶性肿瘤的发生发展存在着密切的关系［3］。因其表现出许多肿瘤抑制基因的特点，故被归为侯选抑癌基因［4］。ZANDI等［5］研究表明，FHIT 在子宫内膜癌组织中存在表达降低或缺失现象，与其发生、发展关系密切，FHIT蛋白的阳性表达率随着由正常子宫内膜至不典型性增生子宫内膜，再到子宫内膜腺癌的演变过程呈逐渐下降趋势。但也有学者得出与其不一致的结论，认为FHIT基因的异常与子宫内膜癌的组织学分级关系不大［6］。由此可见，FHIT蛋白表达与子宫内膜癌的相关病理参数之间尚未有确切关系，还有待进一步研究。

本文研究结果表明，与正常子宫内膜、单纯性增生子宫内膜及不典型性增生子宫内膜相比较，子宫内膜样腺癌组织中FHIT蛋白表达明显下调，从而提示FHIT蛋白基因表达下调或缺失可能参与了子宫内膜样腺癌的发生过程。另外本研究结果显示，子宫内膜样腺癌组织中FHIT蛋白的阳性表达率随着肿瘤分化程度的降低、临床病理分期的增加、肌层浸润深度的加深以及淋巴结的转移而明显降低，提示FHIT蛋白表达下调或缺失与子宫内膜样腺癌的发展及侵袭转移有关。

3.2 Survivin蛋白在子宫内膜样腺癌组织表达及其临床意义

Survivin基因是AMBROSINI等于1997年在人类基因组的杂交筛选中分离并克隆出的，是目前发现的作用最强的凋亡抑制因子［7－8］。Survivin基因编码的蛋白（Survivin蛋白）是目前发现的相对分子质量最小也是抗细胞凋亡作用最强的凋亡抑制蛋白（IAP），它与恶性肿瘤的发生、发展及预后均密切相关，是近年来研究的热点［9］。

本研究结果显示，Survivin蛋白在正常子宫内膜、单纯性增生子宫内膜组织中均低表达，而在不典型性增生子宫内膜及子宫内膜样腺癌组织中则存在高表达现象，提示Survivin在子宫内膜样腺癌的发生中发挥一定作用，这与其他研究所得出的结论相一致［10］。Survivin蛋白在子宫内膜不典型性增生中的阳性表达率较高（70.0%），提示Survivin可能在子宫内膜样腺癌发生过程中是一个早期事件。因此，可能对子宫内膜样腺癌的早期诊断有一定的指导意义。另外，本研究结果显示，子宫内膜样腺癌组织中Survivin蛋白阳性表达率随着肿瘤分化程度的降低、临床病理分期的增加、肌层浸润深度的加深以及淋巴结的转移而增高，提示Survivin蛋白表达增加与子宫内膜样腺癌发展及侵袭转移有关。

3.3 子宫内膜样腺癌组织中联合检测FHIT蛋白和Survivin蛋白的意义

本文的研究结果显示，分化越差、分期越晚、肌层浸润越深并伴有淋巴结转移的癌组织中既会出现Survivin蛋白过表达，又存在FHIT蛋白表达降低，其二者表达呈显著负相关。由此可知，癌基因的激活和抑癌基因的失活同时在子宫内膜样腺癌的发生和发展过程中发挥作用。因此，联合检测癌基因（如Survivin蛋白）的激活和抑癌基因（如FHIT蛋白）的失活，可能对子宫内膜癌的早期诊断有一定的价值，并可能对正确评估病情及制定最佳治疗方案具有积极的意义。

［1］刘玉琴，高英敏，王秀华.子宫内膜癌中fhit、survivin的表达及临床意义［J］.现代妇产科进展，2004，13（6）：423－425.

［2］ISHII H，DUMON K R，VECCHIONE A，et al.Effect of adenoviral transduction of the fragile histidine triad gene into esophageal cancer cells［J］.Cancer Res，2001，61（4）：1578－1584.

［3］王松芬，项锋钢，李宏.FHIT在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达及意义［J］.齐鲁医学杂志，2012，27（4）：286－288.

［4］PALUMBO E，TOSONI E，MATRICARDI L，et al.Genetic instability of the tumor suppressor gene FHIT in normal human cells［J］.Genes Chromosomes Cancer，2013，52（9）：832－844.

［5］ZANDI R，XU K，POULSEN H S，et al.The effect of Adenovirus－Mediated gene expression of FHIT in small cell lung cancer cells［J］.Cancer Invest，2011，29（10）：683－691.

［6］赵文科，牛兆山.子宫内膜腺癌组织中FHIT蛋白的表达及其意义［J］.青岛大学医学院学报，2007，43（3）：250－252.

［7］AMBROSINI G，ADIDA C，ALTIERI D C.A novel antiapoptosis gene，survivin，expressed in cancer and lymphoma［J］.Nat Med，1997，3（8）：917－921.

［8］路伟，冯震，阎超.siRNA联合预照射对肺癌细胞survivin基因表达影响［J］.齐鲁医学杂志，2015，30（3）：256－259.

［9］SAMUEL REICH E.Cancer trial errors revealed［J］.Nature，2011，469（7329）：139－140.

［10］王长林，吴彬，段承志，等.Survivin和bFGF在子宫内膜样腺癌中的表达及其意义［J］.泰山医学院学报，2010，31（12）：914－917.