张 俐，钱桂英

(常熟市中医院，江苏 常熟 215500)



HPLC法测定妇安宁洗剂中苦参碱含量

张 俐，钱桂英

(常熟市中医院，江苏 常熟 215500)

目的：对妇安宁洗剂中苦参碱的含量进行测定，为药品质量标准的评价和临床用药提供药理依据和参考。方法：采用HPLC法测定妇安宁洗剂中苦参碱的含量，色谱柱：Prominenece UFLC XDB-C18(4.6mm×250.0mm，5μm)；流动相：乙腈-水-0.1%乙胺(65∶35∶0.2)；流速：1.0mL/min；紫外线检测波长：220nm；柱温：30℃。结果：苦参碱在0.16～1.28μg质量浓度范围内，与峰面积线性关系良好,色谱峰面积结果RSD=2.9%(n=6)，表明方法重复性良好；供试品溶液在12 h内稳定；使用乙腈-水-乙胺(65∶35∶0.2)，结果显示回收率较高，分离效果好，精密度高，准确可靠。结论：HPLC法能够完整、全面地反映妇安宁洗剂的质量，结果可靠，且操作简便，重现性好，可用于妇安宁洗剂的质量控制，为苦参的临床使用提供了理论依据，可为其他药品的检测方法提供参考。

苦参碱；妇安宁洗剂；HPLC法；含量测定

妇安宁洗剂为我院根据临床验方研制的中药外用制剂，主要由苦参、野菊花、黄柏、蛇床子、土茯苓等十五味中药组成，具有清利下焦湿热、消炎止痒、除秽杀菌的功效，临床常用于细菌性、霉菌性、滴虫性阴道炎等妇科疾病以及淋病、尖锐湿疣等性传播疾病和多种皮肤瘙痒症的防治[1]。为深入了解药品的成分及功效，控制药品的质量，本研究采用HPLC法对制剂进行定性鉴别，以苦参有效成分为指标测定其中苦参碱的含量。HPLC法测定苦参碱方法简便、准确且重复性好[3]，可为妇安宁洗剂质量标准的评价提供药理依据。苦参碱是豆科植物苦参的干燥根、植株、果实经乙醇等有机溶剂提取的主要成分，具有利尿、抗病原体、抗过敏、抗炎等作用[2]。

1 仪器与方法

1.1 仪器

岛津液相色谱仪Prominenece UFLC，包括列可变波长检测器、四元泵、化学T作站(日本岛津公司生产)；AUW220D万分之一电子天平(日本岛津公司生产)；数控超声波清洗机PS-30A、微孔滤膜、真空泵抽滤装置(东莞市洁康超声波设备有限公司生产)；苦参碱对照品(供含量测定用，中国食品药品检定研究院提供，批号：110805．201008)；妇安宁洗剂(本院剂室自制，批号分别为：20140610-20080613)，乙腈(色谱纯)，甲醇、无水乙醇、三乙胺均为分析纯，水为重蒸馏水。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱：Prominenece UFLC XDB-C18(4.6mm×250.0mm，5μm)；流动相：乙腈-水-0.1%乙胺(65∶35∶0.2)；流速：1.0mL/min；紫外线检测波长：220nm；柱温：30℃，进样量：10μL。

1.2.2 对照品溶液制备 精密称取干燥至恒重的苦参碱对照品10.88mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀得对照品溶液。

1.2.3 供试品溶液制备 取妇安宁洗剂10mL，置具塞棕色量瓶中，加浓氨溶液2mL，摇匀加20mL三氯甲烷，分液漏斗过滤，按上述步骤提取3次，提取液蒸干，残渣加40%甲醇溶解并定容于25mL量瓶中，用微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

1.2.4 系统适用性试验 分别吸取两组溶液各10μL，注入液相色谱仪，按苦参碱峰计算，理论塔板数为3 000以上测定。根据以上制备条件分别进行专属性试验、线性关系考察、精密度实验、重现性实验、稳定性实验、加样回收率试验和样品含量测定。

2 结果

2.1 专属性试验

对照品溶液、供试品溶液色谱结果见图1，供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致，阴性对照溶液在对照品溶液色谱峰相应的保留时间处没有出峰，表明其他成分对供试品溶液中苦参碱的测定无干扰，专属性较好。

图1 对照品与供试品溶液色谱

2.2 线性关系考察

精密吸取上述对照品溶液(0.218g·L-1)1.25、2.5、5.0、7.5、10.0mL分别置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，使制成含苦参碱为27.25、54.50、109.00、163.50、218.00mg·L-1的对照品溶液。从中分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样质量浓度(mg·L-1)为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，得标准曲线方程为A=9 556C+23 490(r=0.999 8),结果表明，苦参碱在27.25～218.00mg·L-1质量浓度范围内与峰面积线性关系良好。

2.3 精密度试验

取同一批研究组溶液(批号20140610)制得供试品溶液，按照上述色谱条件连续重复进样6次，记录峰面积，结果苦参碱色谱峰面积的RSD为0.79%，表明仪器精密度良好。

2.4 重复性试验

取同一批研究组溶液，平行制备6份供试品溶液，色谱峰面积结果RSD=2.9%(n=6)，表明该方法重复性良好。

2.5 稳定性试验

精密量取同一供试品溶液分别于0、2、4、8、10、12h进样10μL，RSD=1.5%，表明供试品溶液在12h内稳定。

2.6 含量测定

4批样品含量测定结果详见表1。

表1 妇安宁洗剂中苦参碱含量 (n=3，mg·mL-1)

2.7 回收率试验

采用加样回收法，精密量取已知含量的妇安宁洗剂共4组，每组分别精密加入80μg/mL的苦参碱对照组贮备液2.0、4.0、6.0mL，制备供试品。色谱测定苦参碱回收率结果，详见表2。

表2 苦参碱回收率试验结果

3 讨论

妇安宁洗剂是由多种中药配制而成的中药复方外用制剂。苦参是妇安宁洗剂的主要成分，苦参碱系苦参中含量较高的生物碱，具有抑制金黄色葡萄球菌、变形杆菌、大肠杆菌等作用[4]，本研究采用HPLC法测定苦参碱的含量作为妇安宁洗剂质量控制的主要指标。在制备供试品溶液时，将苦参碱萃取完全，通过氧化铝柱洗脱，可除去许多其他组分的干扰，保护了色谱柱，并使峰形更单一。有研究表明，选用乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液、甲醇-水-三乙胺等方法分离效果均不理想，本研究使用乙腈-水-乙胺(65∶35∶0.2)作为流动相，结果显示回收率较高，分离效果好，精密度高，结果准确可靠，是测定妇安宁洗剂中苦参碱含量的有效方法。在选择波长方面，对苦参碱标准溶液进行全波长扫描，结果表明最大吸收值位于标准溶液200nm处[5-6]。但考虑紫外吸收末端的干扰较大，故本研究选择检测波长为220nm。研究结果表明，本方法能够完整、全面地反映妇安宁洗剂的质量，结果可靠，且操作简便，重现性好，可用于妇安宁洗剂的质量控制，为苦参的临床使用提供了理论依据，可为其他药品的检测方法提供参考。

[1] 马玲娣，朱志超，卢绪章，等.苦参碱对K562细胞NKG2D配体表达的影响及其机制研究[J].中华血液学杂志，2014，35(5)：438-442.

[2] 侯杰荣，柯发敏，侯思奎.HPLC法同时测定苦参中3种生物碱的含量[J].中药材，2014，37(2)：273-275.

[3] 张广求，王树平，刘文.高效液相色谱法测定参菊洗剂中苦参碱的含量[J].中国医院用药评价与分析，2014，14(3)：232-234 .

[4] 罗德啟.高效液相色谱法测定痒葏洗剂中苦参碱和氧化苦参碱的含量[J].医药导报，2011，30(1)：103-104.

[5] 郑堰心，张丽，邓虹珠.槐定碱、苦参碱和苦豆碱对LPS诱发结肠上皮细胞炎症模型中细胞因子IL-6和TNF-α水平的影响[J].中国实验方剂学杂志，2014，20(8)：133-136.

[6] 秦学玲，康绍建，周磊.RP-HPLC法同时测定清肺抑火片中苦参2种成分的含量[J].云南中医中药杂志，2014，35(10)：67-68.

(责任编辑：魏 晓)

Determination of Matrine in Fu anning lotion by HPLC Method

Zhang Li，Qian Guiying

(Changshu Municipal Hospital of TCM，Changshu 215500，China)

Objective:Determinate the content of matrine in Fu Anning lotion, as the drug quality standard of evaluation and pharmacological basis and reference for the clinical medication. Methods:Fu Anning lotion were determined by HPLC method, the content of matrine in，Chromatographic column: Prominenece UFLC XDB-C18(4.6mm×250.0mm，5μm)；Mobile phase：acetonitrile-water-0.1% ethylamine(65∶35∶0.2)；The velocity：1.0 mL/min；UV detection wavelength ：220nm；Column temperature：30℃. Results:Matrine in 27.25～218.00mg·L-1mass concentration range, and good linear relationship between peak area, Chromatographic peak area results 2.9% RSD (n = 6), showed that method repeatability is good ；Within 12h of test sample solution stability; Using acetonitrile-water-ethyl amine (65∶35∶0.2), the results show that the recovery rate is higher, the separation effect is good, high precision, accurate and reliable. Conclusion:HPLC method to complete, the quality of the overall reaction Fu Anning lotion, the result is reliable, and easy operation, good reproducibility, and can be used in the quality control of Fu Anning lotion, provides a theoretical basis for the clinical use of sophora, can provide reference for other drug detection method.

Matrine；Fu anning lotion；HPLC；Content Determination

2015-01-30

张俐(1961-),女，江苏省常熟市中医院副主任药师，研究方向为医院药学。

R284

A

1673-2197(2015)13-0027-02

10.11954/ytctyy.201513011