金 华，丁家怡，邵 骏

（南通市妇幼保健院生殖医学中心，江苏 南通 226006）

激光薄化透明带对预期良好患者新鲜胚胎移植周期临床结局的影响

金 华，丁家怡，邵 骏

（南通市妇幼保健院生殖医学中心，江苏 南通 226006）

目的 探讨预期良好的患者新鲜胚胎移植时进行激光薄化透明带是否获益。方法将符合研究标准(年龄25～40岁、无反复种植失败、透明带异常等情况)的278例患者按病历编号依次编入观察组和对照组，观察组139例患者胚胎移植前使用激光薄化透明带的方式进行辅助孵化，对照组139例患者胚胎移植前不进行激光薄化透明带，比较两组的临床结局。结果观察组和对照组在平均年龄[(29.80±3.90)岁vs(29.88±3.60)岁]、平均获卵数[(11.68±5.00)个vs(12.05±5.94)个]、卵子成熟率(86.26%vs 86.15%)、正常受精率(68.86%vs 69.65%)、卵裂率(97.41%vs 98.11%)、优质胚胎率(39.42%vs 41.00%)、平均移植胚胎数[(1.94±0.23)个vs(1.95±0.30)个]、临床妊娠率(63.31%vs 61.15%)和胚胎种植率(44.07%vs 44.28%)等方面比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论激光薄化透明带对于预后良好的患者，不能提高其新鲜胚胎移植周期的临床妊娠率和种植率。

激光薄化透明带；预期良好；新鲜胚胎移植；临床妊娠率；种植率

囊胚从透明带内孵出是胚胎种植的重要过程之一，体外培养、胚胎冻融等会造成透明带组成蛋白发生变化，导致透明带硬化，从而影响胚胎的孵出。激光薄化透明带作为辅助孵化的技术之一，多项研究表明其可以帮助存在反复种植失败、透明带异常、胚胎冻融等情况的患者获得更好的妊娠率[1-4]，但是进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的患者是否需要常规进行激光薄化透明带，目前仍有争论。本研究就是探讨激光薄化透明带技术能否提高预期良好患者鲜胚移植周期的临床妊娠率和种植率。

1 资料与方法

1.1 一般资料 从2014年1～12月本中心接受IVF常规超促排卵治疗方案的患者中选择预期良好的患者。纳入标准：①年龄25～40岁；②无反复种植失败；③治疗途中未发现卵子透明带性状改变和透明带厚度＞20 μm的情况；④取卵周期进行鲜胚移植。将符合标准的278例患者按病历编号依次分为观察组(n=139)和对照组(n=139)。本研究经南通市妇幼保健院生殖伦理委员会审批并批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 常规IVF流程 黄体期给予长效促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a，达菲林)0.94～1.25 mg，降调14～21 d以促性腺激素(Gn，果纳芬)150～225 IU启动，至少2～3个优势卵泡＞18 mm时于当晚注射绒毛膜促性腺激素(hCG，丽珠)6 000 IU，36 h后取卵，获得卵子后2～4 h进行授精，授精后16 h观察原核，胚胎发育第3天选择优质胚胎进行鲜胚移植。

1.2.2 胚胎评分标准 本中心Day3胚胎评分分4级。Ⅰ级：7～9个卵裂球、卵裂球均一度较好、碎片＜5%；Ⅱ级：7～12个卵裂球、卵裂球均一度尚可、碎片5%～20%；Ⅲ级：6～16个卵裂球、卵裂球均一度一般、碎片20%～40%；Ⅳ级：卵裂球均一度较差、碎片＞40%。各级胚胎有多核、胞浆退化等现象，评分降一级；胚胎评分有交叉，以低等级记分；相同评分时有正常早卵裂和胚胎发育第3天致密化融合现象的胚胎，移植时优先选择。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级胚胎为可移植胚胎，其中的Ⅰ、Ⅱ级胚胎为优质胚胎。

1.2.3 激光薄化透明带流程 观察组患者移植胚胎前使用激光系统(Octax，Germany)进行薄化透明带操作，使用半环状薄化程序，对透明带1/4周长区域进行操作，时长根据需要选择1～1.4 ms，操作完成后测量透明带厚度，厚度应小于10 μm。

1.2.4 胚胎移植和临床妊娠的判断 胚胎发育第3天在B超引导下将胚胎移植至宫腔，移植后两周检测血βhCG，移植后35 d B超检测，有孕囊和芯芽搏动的判断为临床妊娠。

1.3 观察指标 观察两组患者的年龄、平均获卵数、卵子成熟率、正常受精率、卵裂率、优质胚胎率、平均移植胚胎数、临床妊娠率和胚胎种植率等指标。

1.4 统计学方法 应用SPSS19.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间均数比较采用t检验，计数资料采用率表示，组间率的比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的临床资料比较 两组患者的平均年龄、平均获卵数、卵子成熟率、正常受精率、卵裂率和优质胚胎率等临床资料比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

表1 两组患者的临床资料比较(±s)

表1 两组患者的临床资料比较(±s)

组别观察组(n=139)对照组(n=139)t/χ2值P值年龄(岁) 29.80±3.90 29.88±3.60 0.171 0.865平均获卵数(个) 11.68±5.00 12.05±5.94 0.600 0.549卵子成熟率(%) 86.26(1400/1623) 86.15(1443/1675) 0.009 0.927正常受精率(%) 68.86(964/1400) 69.65(1005/1443) 0.208 0.648卵裂率(%) 97.41(939/964) 98.11(986/1005) 1.112 0.29优质胚胎率(%) 39.42(380/964) 41.00(412/1005) 0.508 0.476

2.2 两组患者的临床结局比较 观察组患者在进行激光薄化透明带操作并移植后，在临床妊娠率和胚胎种植率上与未进行激光薄化透明带操作的对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，说明激光薄化透明带操作并没有帮助观察组患者提高胚胎的种植潜力，未能帮助患者提高妊娠率，见表2。

表2 两组患者的临床结局比较(±s)

表2 两组患者的临床结局比较(±s)

组别观察组(n=139)对照组(n=139)t/χ2值P值平均移植胚胎数(个) 1.94±0.23 1.95±0.30 0.217 0.828临床妊娠率(%) 63.31(88/139) 61.15(85/139) 0.138 0.711胚胎种植率(%) 44.07(119/270) 44.28(120/271) 0.002 0.961

3 讨论

囊胚从透明带内孵出是胚胎种植的重要过程之一，胚胎孵化是一个非常复杂的过程，具体机制至今尚未完全明晰，但透明带均起着关键的作用[5]。透明带由4种糖蛋白(ZP1、ZP2、ZP3、ZP4)组成，它既是卵子和胚胎的保护屏障，也是卵子和胚胎的营养通道[5]。不同个体之间的透明带厚度差异较大，但是高龄患者的透明带比年轻患者厚度要大，同时高龄患者透明带硬度增加，弹性却变小，导致胚胎孵出困难，推测这可能是高龄患者妊娠率低下的原因之一。同时鼠胚和人类胚胎体外培养研究表明，透明带在体外培养时会随着培养时间逐渐增厚且变得坚固，从而引起囊胚孵出困难[6-7]。除此以外，胚胎冻融也会造成透明带糖蛋白发生变性，导致透明带硬化，从而影响胚胎的孵出。Cohen[8]首次提出在透明带上开口进行辅助孵化可以改善IVF患者的临床结局后，多种辅助孵化手段开始应用于临床，早期辅助孵化主要是使用穿刺针等工具在透明带上机械切割出缺口或者使用Tyrode酸或链霉蛋白酶对透明带进行消化，虽然获得临床结局的改善，但是这几种方式都存在胚胎损伤较大和改变培养环境而影响胚胎发育的缺点[9-10]，激光薄化透明带作为最新的辅助孵化的技术之一，具有非接触性、操作简便快速、定位准确等优点，多项研究表明其可以帮助存在反复种植失败、透明带异常、胚胎冻融等情况的患者获得更好的妊娠率，特别是在高龄患者中效果更加明显[1-4]，尽管如此，这项技术还是有不少争议，国内外有研究表示激光薄化透明带并未改善临床结局[11-12]，甚至给正常的孵化带来干扰[13-14]，而激光薄化透明带本身可能影响胚胎的发育潜能，甚至带来DNA损伤[15]。

从本研究可以看出，在排除反复种植失败、透明带异常、胚胎经过冻融等情况后，两组在平均年龄、平均获卵数、卵子成熟率、正常受精率、卵裂率、优质胚胎率、平均移植胚胎数、临床妊娠率和胚胎种植率等方面差异均无统计学意义(P＞0.05)，即激光薄化透明带并没有提高预期良好患者的临床妊娠率和胚胎种植率。究其原因可能是此类患者的大部分胚胎在种植时并没有遇到孵化困难，也有可能是激光薄化透明带时没能薄化透明带最致密的内层，而内层可能是影响胚胎孵出的原因[16]，从而未能改善临床结局。

综上所述，激光薄化透明带并未使预期良好患者鲜胚移植周期获益，同时因该技术潜在的不良影响，笔者认为在IVF治疗鲜胚移植周期中常规进行使用激光薄化透明带是不合适的。

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R394.8

B

1003—6350（2015）24—3708—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.24.1338

2015-05-08)

金 华。E-mail：1066789102@qq.com