袁 波，石 磊，应振毅，林 蕾，应孟夏，周琼艳

(宁波大学医学院附属医院，浙江 宁波 315020)

●医学研究

MPP8在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及意义

袁 波，石 磊，应振毅，林 蕾，应孟夏，周琼艳

(宁波大学医学院附属医院，浙江 宁波 315020)

目的:探讨M-期磷蛋白8(MPP8)在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用免疫组织化学方法，对50例皮肤恶性黑色素瘤和50例色素痣组织中MPP8蛋白表达进行检测，并结合患者临床病理特征对检测结果进行综合分析。结果:皮肤恶性黑色素瘤组织中MPP8的阳性表达率及表达水平较色素痣组织高，且表达量与黑素瘤局部淋巴结转移成正相关。结论:测定皮肤恶性黑色素瘤组织中MPP8蛋白表达，为患者预后的判断和分子靶向等恶性黑色素瘤治疗药物的应用奠定了理论基础，结论值得进一步研究。

MPP8;皮肤恶性黑色素瘤;蛋白表达

黑色素瘤是常见的皮肤癌之一，而侵袭转移仍是导致恶性黑色素瘤患者死亡的最主要原因，恶性黑色素瘤在临床上早期即可出现淋巴结、肝、肺、脑等处的转移，患者一旦出现转移，治疗上比较棘手，且预后很差［1］。本研究主要探讨黑色素瘤的发生发展中MPP8可能的角色。

一、资料和方法

(一)病例收集。

收集皮肤恶性黑色素瘤标本50例(黑色素瘤组)和皮肤色素痣(对照组)50例，所有患者术前无放、化疗及靶向治疗，临床及病理资料完整，所有标本均经病理科组织病理学和免疫组织化学确诊。

(二)实验方法。

鼠抗人MPP8单克隆抗体标本经10%甲醛固定，制成防脱石蜡切片，采用免疫组化SP法染色:常规脱蜡至水;柠檬酸盐缓冲液高温修复2min，冷却后PBS冲洗;再用3%H202阻断10min，PBS冲洗;擦干后迅速加入MPP8单克隆抗体(1：100)，室温孵育1h后PBS冲洗;滴加二抗，孵育15min后PBS冲洗;DAB显色;苏木精复染，常规脱水，透明，中性树胶封片。显微镜观察。用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

(三)免疫组化的结果判断。

MPP8的表达由染色阳性细胞的数量和染色程度来评分，阳性细胞数量(＜5%，0分;5-25%，1分;25-50%，2分;＞50%，3分)，染色强度(无色，0分;淡黄色，1分;黄色，2分;棕黄色，3分)，两者评分相乘，0分定为阴性(-)，1-3分定为弱阳性(+)，4-6分定为中等阳性(++)，＞6分定为强阳性(+++)。

(四)统计分析。

采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析。采用卡方检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

二、结 果

(一)MPP8蛋白的表达和分布。

50例黑色素瘤组织中，MPP8阳性率为66.7%(33例)，显著高于色素痣的阳性率24.0%(12例)，差异有统计学意义(P＜0.05)(见表1)。

表1 MPP8蛋白在皮肤黑色素瘤和色素痣中的阳性表达情况

(二)MPP8表达水平与黑色素瘤患者临床病理特征的关系。

MPP8蛋白表达量与黑色素瘤淋巴结转移呈正相关(P＜0.05)，而与患者年龄、性别、肿瘤厚度、肿瘤厚度无显著相关性(P＞0.05)(见表2)。

表2 皮肤黑色素瘤中MPP8蛋白表达与患者临床病理特征的关系

三、讨 论

MPP8在结构上它含有2个功能域:氨基端染色质域和羧基端的锚蛋白结构域［2］，在有丝分裂期，体内与体外实验均发现MPP8通过调节DNA甲基化和组蛋白H3甲基化之间的相互作用，调节基因的转录，参与细胞的各个生命过程［3］。MPP8结合甲基化H3K9后可以招募H3K9甲基转移酶GLP和ESET以及DNA甲基转移酶Dnmt3a形成沉默复合体到E-cadherin基因的启动子上。对E-cadherin基因启动子的H3K9(H3K9)和DNA进行甲基化，抑制E-cadherin的表达［3］，MPP8通过调控E-cadherin的表达，在肿瘤的恶性化过程中扮演着重要的角色。

在本研究中发现，人皮肤黑色素瘤组织中MPP8蛋白表达阳性率显著高于色素痣，且MPP8的表达量与黑素瘤局部淋巴结转移成正相关。肿瘤细胞从原发部位脱落是肿瘤转移的始动环节，这一过程与细胞黏附功能降低密切相关。钙粘素E-cadherin可与细胞骨架相互作用，形成具有锚定作用的复合物。各种原因导致E-cadherin复合体的低表达，都将导致细胞间粘附连接的减弱，进而导致肿瘤的转移。

综上所述，MPP8在人皮肤黑色素瘤组织中高表达，并且与局部淋巴结侵袭关系密切，作用机制可能与MET相关，MPP8在黑色素瘤组织中的作用及作用机制，需要进一步的研究。

［1］Cancer statistics［J］.JAMA，2013，310(9):982.

［2］Chang Y，Horton J R，Bedford M T，et al.Structural insights for MPP8 chromodomain interaction with histone H3 lysine 9:potential effect of phosphorylation on methyl-lysine binding［J］.J Mol Biol，2011，408 (5):807-814.

［3］Kokura K，Sun L，Bedford M T，et al.Methyl-H3K9-binding protein MPP8 mediates E-cadherin gene silencing and promotestumour cell motility and invasion［J］.EMBO J，2010，29(21):3673-3687.

R739.5

A

1002-1701(2015)05-0123-02

2014-07

袁 波，男，硕士，主治医师，研究方向:皮肤恶性肿瘤。

宁波市自然科学基金(编号:2014A610224)。

10.3969/j.issn.1002-1701.2015.05.065