陈四平，张盼盼（河北师范大学化学与材料科学学院，河北石家庄050024）

液质联用技术（LC-MS）分析雪花梨中化学成分

陈四平，张盼盼
（河北师范大学化学与材料科学学院，河北石家庄050024）

摘要：利用液质谱联用技术配合二极管阵列紫外数据分析雪花梨中化学成分。用Agilent 1200高效液相色谱-3200 QTRAP型质谱联用仪，C18色谱柱，乙腈-水为流动相梯度洗脱，采用电喷雾负离子模式采集数据，结合二极管阵列紫外数据。经与文献检索相关质谱与紫外数据对比分析雪花梨中的化学成分。雪花梨提取物二氯甲烷部位和甲醇部位共监测出7个可推测成分。通过分析对比，推测出雪花梨提取物中7个黄酮类成分。

关键词：雪花梨；液质联用；黄酮类

雪花梨为蔷薇科梨亚科植物，主要产地有河北、湖北、山东、辽宁、安徽、江苏、甘肃、四川等省[1]，其中河北赵县的雪花梨为优良品种，每年的产量居全国第一，雪花梨作为大家最喜欢的水果之一，具有清咽利喉、止咳化痰、解酒等很多功效。雪花梨还常作为食用和保健品的原料，如雪梨枇杷膏、止咳梨浆、秋梨润肺膏等，这些产品均具有良好的清咽润喉作用[2-3]。虽其疗效显著，但其有关化学成分方面研究较少，仅在其同属品种刺梨及软梨中发现黄酮类、生物碱、多糖等成分[4-5]，Durkee等发现梨中含有丰富的多酚类物质，主要为黄酮和酚酸物质，如儿茶素、熊果苷、绿原酸等，其具有抑菌，抗氧化和清除自由基等作用[6]。因此采用现代方法进行了雪花梨总黄酮的提取，并利用高效液相与质谱联用技术（LC-MS）配合紫外数据对其化学成分进行简单分析，为进一步开发雪花梨提供研究基础。

1　材料与设备

1.1材料与试剂

雪花梨：采自河北赵县；娃哈哈纯净水：山西娃哈哈昌盛饮料有限公司；AB-8大孔树脂：沧州宝恩化工厂；乙腈（色谱纯）：天津市康科德科技有限公司；甲醇、乙醇等（分析纯）：天津百世化工有限公司。

1.2仪器与设备

Agilent 1200高效液相色谱-3200 QTRAP型串联四极杆线性离子阱质谱联用仪：美国Agilent公司；600-2998高效液相色谱仪-二极管检测器：Waters公司。

2　方法与结果

2.1雪花梨黄酮的提取和粗分

挑选无腐烂的雪花梨，清洗，去皮去核，切块，加入少量异VC-Na后，榨汁，加5倍量的60%的乙醇在75℃下水浴浸提2 h，期间不断搅拌，过滤后对滤液进行减压浓缩，至滤液为原来的1/10，用稀盐酸调pH至2～4，在5℃冰箱中放置过夜，离心，得上清液。将上清液采用AB-8大孔树脂进行吸附，先用大量的蒸馏水洗，后再用二氯甲烷和甲醇进行洗脱，分别收集二氯甲烷和甲醇洗脱液，减压浓缩洗脱液，冷冻干燥，分别得到二氯甲烷组分和甲醇组分[7-19]。

2.2测定条件

2.2.1测定波长的确定

分别取二氯甲烷、甲醇组分适量，用乙腈溶解，超声5 min后，以纯乙腈为空白，在220 nm～400 nm范围内进行扫描。得出二氯甲烷组分和甲醇组分在278 nm均有最大吸收波长，因此测定波长选为278 nm。

2.2.2色谱条件

色谱柱：Discovery C18柱；检测波长：278 nm；进样量：20 μL；流动相：A（0.05%甲酸水溶液），C（纯乙腈）；流速：1.0 mL/min；梯度洗脱，数据分析系统：Empower软件。梯度洗脱程序设置见表1。

按表1洗脱程序分别对前述样品二氯甲烷组分和甲醇组分进行高效液相色谱分析，所得高效液相色谱图见图1、图2。

由色谱图中可以看出，甲醇组分中有4个主要的峰能很好地分离开，各峰出峰时间见表2。其中峰8同峰4的出峰时间一致，峰9同峰5的出峰时间一致，极可能为同一物质。

2.2.3液质联用条件

液相色谱仪：Agilent 1200系统，并配有四元泵、自动进样器、柱温箱和在线脱气机（美国Agilent公司）；色谱条件：色谱柱为DiscoveryC18（250×4.6mm，5μm）；流速1 mL/min；柱温25℃；进样量10 μL；梯度洗脱如表1所列。质谱条件：3200 QTRAP型串联四极杆线性离子阱型质谱仪（美国AB公司）；配有TurboV离子源；质谱条件如下，离子源：电喷雾离子化源ESI；源喷射电压（IS）：-4500V，负离子模式检测；雾化温度：650℃；雾化气压力（GS1，高纯N2）：60 psi（1 psi=6.895 kPa）；辅助气压力（GS2，高纯N2）：65 psi；气帘气压力（高纯N2）：30 psi；解簇电压：-40 V；扫描方式：增强型全扫描（EMS）；EMS采集范围：100 m/z～1 000 m/z；扫描速度：1 000Da/s；数据分析系统：Analyst1.6。

2.2.4液质联用试验

将二氯甲烷组分和甲醇组分分别用乙腈溶解后进入到高效液相-质谱联用仪（HPLC—MS）中，按2.2.3所述条件进行试验，所得结果见表2。

根据液质联用所得高效液相各色谱峰质谱数据图谱结合高效液相二极管阵列检测器所得紫外数据图谱，对雪花梨提取物二氯甲烷组分和甲醇组分中的几个主要色谱峰进行逐个分析，经与文献[20]的数据图谱相对照，初步推测雪花梨提取物二氯甲烷组分和甲醇组分中的化合物成分。其中1号～7号峰确定了相应归属，8、9号峰的出峰时间、MS、UV分别同4、5号峰，应为同一化合物。

3　结论

运用高效液相色谱-二极管阵列联用和高效液相色谱-质谱联用技术得到二氯甲烷和甲醇两部分的紫外图谱和质谱，并将其与文献标准图谱进行了核对，分析出雪花梨中可能含有5-去氧牡荆苷、5，7，8-三羟黄酮-7-葡萄糖醛苷、表儿茶素没食子酸酯、鸢尾甲黄素A、紫黄檀素、杨梅苷、喷杜苷等黄酮成分。

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DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.24.038

收稿日期：2015-08-17

作者简介：陈四平（1963—），男（汉），研究员，硕士，研究方向：天然产物活性成分研究及新药开发。

Chemical Composition of Snow Pear by Liquid Chromatography-mass Spectrometry（LC-MS）Analysis

CHEN Si-ping，ZHANG Pan-pan
（College of Chemistry and Materials Science，Hebei Normal University，Shijiazhuang 050024，Hebei，China）

Abstract：Using liquid mass spectrometry technology with diode array ultraviolet data analyzed chemical composition in the snow pear.With Agilent 1200 high performance liquid chromatography（HPLC）-3200 type QTRAP mass spectrometry instrument，C18column，acetonitrile and water as mobile phase gradient elution，using electrospray ion mode to collect data，combined with diode array ultraviolet data.The literature retrieval related mass spectrometry and ultraviolet data contrast analysis of chemical composition of snow pear.Snow pear extract methylene chloride site and methanol were monitoring 7 can be speculated that component.through the analysis comparison，and infer the snow pear extract seven flavonoids ingredients.

Key words：snow pear；LC-MS；flavonoids