刘维明，张金良(莒县人民医院，山东莒县76500;滨州医学院)

不同胆结石患者血浆和肠黏膜组织中D-乳酸及DAO活性观察

刘维明1，张金良2
(1莒县人民医院，山东莒县276500;2滨州医学院)

摘要:目的探讨胆石症患者血浆和肠黏膜组织的D-乳酸及二胺氧化酶(DAO)活性变化的临床意义。方法选择105例胆石症患者作为观察组，分析结石性质，对比患者血浆和肠黏膜组织的D-乳酸及二胺氧化酶(DAO)活性，并与健康对照组比较。结果根据结石化学性质，胆色素结石患者所占比例最高，为44.76%，其次为胆固醇结石，混合性结石最低;胆色素结石患者血浆与肠黏膜的D-乳酸活性显著低于对照组、胆固醇结石者及混合性结石者，DAO活性显著高于对照组、胆固醇结石者及混合性结石者(P均＜0.05)。除胆色素结石外，不同性质和部位的结石患者血浆与肠黏膜的D-乳酸活性及DAO活性比较差异均无统计学意义，与对照组相比差异亦无统计学意义。结论胆色素结石患者血浆与肠黏膜的D-乳酸活性较低、DAO活性较高，肠黏膜受损更严重。

关键词:胆石症;肠黏膜通透性; D-乳酸;二胺氧化酶

研究显示，肠道屏障功能受损可能是胆结石产生的重要因素之一［1］。D-乳酸和二胺氧化酶(DAO)活性检测是评价肠黏膜通透性的可靠指标［2］。本研究观察了不同部位及不同结石性质的胆石症患者血浆和肠黏膜组织的D-乳酸及DAO活性的变化，现报告如下。

1　资料与方法

1.1临床资料选择2012年9月～2013年9月我院收治的胆石症手术治疗患者105例(观察组)，男65例、女40例，年龄29～58(36.8±3.7)岁。均符合WHO制定的胆石症诊断标准，临床表现为反复发作性胆绞痛亦或上腹部疼痛，经腹部B超、胰胆管造影等证实为胆结石［2］。排除年龄≥60岁、有手术禁忌证、合并严重心、肺器官衰竭者［3］。选择同期在我院健康体检的志愿者30例作为对照组，男19例、女11例，年龄30～60(37.2±2.2)岁。根据结石化学性质，胆色素结石47例、胆固醇结石41例、混合性结石17例;根据结石部位，胆囊结石35例、胆管结石35例、胆囊结石合并胆管结石35例，

1.2检测方法健康对照组于体检当日、观察组于术前1 d采集清晨空腹静脉血6 mL，分装在3个试管内，分别加入30 μL 10%的EDTA-Na2、30 μL抑肽酶、30 μL生理盐水，混匀后4℃下1 500 r/min离心15 min，－70℃保存待测。清洁肠道后通过肠镜取回肠末段黏膜组织4块，称取200 mg放入匀浆器内，加入PBS冰浴匀浆，离心。采用分光光度计检测血液和肠黏膜组织的D-乳酸及DAO活性水平，严格按试剂盒说明书操作。DAO活性=匀浆液的DAO含量/蛋白含量×0.05。

1.3统计学方法采用SPSS13.0统计软件，计量数据以珋x±s表示，采用配对t检验，率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

对照组血浆和肠黏膜组织D-乳酸分别为(4.58 ±0.34)、(54.11±3.22)μg/mL，DAO活性分别为(4.47±0.28)、(62.64±4.11) U/L。胆色素结石患者血浆与肠黏膜的D-乳酸活性显著低于对照组、胆固醇结石者及混合性结石者，DAO活性显著高于对照组、胆固醇结石者及混合性结石者，P均＜0.05。除胆色素结石外，不同性质和部位的结石患者血浆与肠黏膜的D-乳酸活性及DAO活性差异均无统计学意义，与对照组比较差异亦无统计学意义。详见表1。

3　讨论

胆石症的发生机制目前尚未阐明。研究认为，细菌感染和肠屏障功能性损伤在胆石形成的进程中具有一定作用［3］。胆道感染致病菌源自肠道细菌逆行感染，进而影响肠道屏障功能，促使肠道细菌及内毒素更易进到肝胆系统，从而参与胆石症发病进程［4］。研究不同部位及不同性质的胆石症患者肠道屏障功能对了解胆结石发病进程具有重要意义。

D-乳酸是胃肠道固有细菌的产物，正常情况下很少被机体吸收，人体也不具备分解D-乳酸的酶系统。当肠黏膜受损时，D-乳酸可以通过损伤的肠黏膜进入血液导致血浆D-乳酸水平升高。因此测定血浆D-乳酸水平可以反映肠黏膜损伤情况，进而反映肠黏膜通透性变化。DAO是肠黏膜上层绒毛细胞中具有高度活性的细胞内酶，存在于小肠黏膜的上层绒毛内。当肠黏膜细胞受损，坏死细胞脱落后，其被释放而经肠腔入血，其水平可以反映肠黏膜损伤情况和肠黏膜通透性变化［5，6］。

本研究根据结石部位分类发现，胆囊结石、胆管结石、胆囊结石合并胆管结石患者所占比例相同;根据结石性质分类发现，胆色素结石患者所占比例高于胆固醇结石、混合性结石患者。与Brun等［7］报道相似，表明胆石症发生的部位比较随机，但在性质上，胆色素结石则相对更为常见。不同部位胆结石患者血浆和肠黏膜D-乳酸及DAO活性两两比较均无统计学差异;而胆色素结石患者血浆和肠黏膜的D-乳酸水平更低，但DAO活性均显著高于其他三者，其余各组间血浆与肠黏膜D-乳酸及DAO活性均无统计学差异。表明胆结石患者肠黏膜通透性的变化与结石性质有关，与结石部位无明显相关。其原因可能是由于机体内的生理变化致使肠道屏障功能减弱，此种异常性改变可因继发性的细菌移位、内毒素血症及胆汁β型葡萄糖醛酸酶水平变化而改变［8］。这对于胆色素结石的产生具有一定的影响，肠道通透性增大可能会影响胆色素结石的病情进展，而肠屏障功能损伤则在其形成和进展中具有一定的促进作用［9］。由于胆石症患者肠黏膜通透性的改变主要与胆石症的性质有关，因此临床上对胆结石高危患者的防治应重视肠屏障功能的变化。从本研究结果来看，胆色素结石患者的血浆和肠黏膜组织内的D-乳酸水平更低，DAO活性更高，这种特点使得胆色素结石更易于鉴别。

综上所述，胆色素结石患者血浆和肠黏膜组织内的D-乳酸水平更低，DAO活性更高，说明此类患者的肠黏膜功能更易受损。临床上应重视此类患者肠屏障功能的变化，以更好地指导治疗。

表1　不同结石性质以及结石部位的胆结石患者血浆和肠黏膜组织D-乳酸及DAO活性(±s)

结石分类　n　D-乳酸(μg/mL)血浆　肠黏膜DAO活性(U/L)血浆　肠黏膜结石性质胆色素结石　47　4.06±0.98*　51.09±7.46*　4.87±0.63*　69.92±4.27*胆固醇结石　41　4.47±0.72　53.18±7.19　4.45±0.55　63.52±8.88混合性结石　17　4.52±0.32　52.38±4.07　4.42±0.32　63.06±3.38结石部位胆囊结石　35　4.68±0.64　56.43±7.36　4.49±0.52　65.29±7.92胆管结石　35　4.73±0.57　57.30±8.29　4.46±0.47　65.14±8.27胆囊结石合并胆管结石　35　4.64±0.72　55.73±7.81　4.42±0.48　64.43±9.03

参考文献:

［1］陈振勇，冯贤松，杨鹏，等.梗阻性黄疸时脾切除对肠黏膜屏障影响的实验研究［J］.中华肝胆外科杂志，2011，17(4) : 309-312.

［2］Klahan S，Kuo CN，Chien SC，et al.oporosis increases subsequent risk of gallstone: a nationwide population-based cohort study in Taiwan［J］.BMC Gastroenterol，2014，14(1) : 192.

［3］Fernández DA，Louzao MC，Vilariño N，et al.Evaluation of the intestinal permeability and cytotoxic effects of cylindrospermopsin ［J］.Toxicon，2014，30(14) : 301-308.

［4］吴鹏，陈强谱，张兴远，等.梗阻性黄疸对大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1和肠黏膜通透性的影响［J］.中华临床医师杂志(电子版)，2010，4(12) : 2546-2548.

［5］舒晓亮，钟静霞，康凯，等.谷氨酰胺对缺血再灌注损伤大鼠肠黏膜炎性反应和通透性的影响［J］.中华临床营养杂志，2013，21(5) : 292-299.

［6］Rodríguez-Berna G，Mangas-Sanjuán V，Gonzalez-Alvarez M，et al.A promising camptothecin derivative: Semisynthesis，antitumor activity and intestinal permeability［J］.Eur J Med Chem，2014，18(83) : 366-373.

［7］Brun A，Price ER，Gontero-Fourcade MN，et al.High paracellular nutrient absorption in intact bats is associated with high paracellular permeability in perfused intestinal segments［J］.J Exp Biol，2014，217(18) : 3311-3317.

［8］Hallam MC，Reimer RA.Postnatal prebiotic fiber intake in offspring exposed to gestational protein restriction has sex-specific effects on insulin resistance and intestinal permeability in rats［J］.J Nutr，2014，144(10) : 1556-1563.

［9］Henao-Morán S，Denova-Gutiérrez E，et al.Morán S，Recreational physical activity is inversely associated with asymptomatic gallstones in adult Mexican women［J］.Ann Hepatol，2014，13(6) : 810-818.

(收稿日期:2014-11-18)

基金项目:滨州市科技发展计划资助项目(2010ZC0768)。

文章编号:1002-266X(2015)18-0053-02

文献标志码:B

中图分类号:R575.6

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.18.019