齐麟 李军 向志明 余英才

4.江西中医药大学生物化学教研室，南昌  330004）

摘要：通过构建斑马鱼（Danio rerio）SAA原核表达载体，在大肠杆菌（E.coli）TB1中诱导表达并纯化获得了斑马鱼SAA融合蛋白，将纯化的斑马鱼SAA蛋白免疫Balb/c小鼠，制备了特异性多克隆抗血清，并研究了斑马鱼SAA融合蛋白与细菌的结合能力及检测了抗体效价。结果表明，纯化的斑马鱼融合SAA蛋白能够与5种细菌直接结合，血清效价达到1∶2 000以上。

关键词：斑马鱼（Danio rerio）;血清淀粉样蛋白A;原核表达;抗体制备;菌结合

中图分类号：Q789        文献标识码：A        文章编号：0439-8114（2015）02-0382-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.031

Prokaryotic Expression， Antibody Preparation and Bacteria Combining of

SAA Protein in Zebrafish

QI Lin1，LI Jun2，XIANG Zhi-ming3，YU Ying-cai4

（1.Railway Police College， Zhengzhou 450053， China; 2. School of Pharmaceutical， Liaocheng University， Liaocheng 252000， Shandong， China; 3.South China Sea Institute of Oceanology， Chinese Academy of Sciences， Guangzhou 510301， China;

4.Department of Biochemistry Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine， Nanchang 330004， China）

Abstract： The SAA fusion protein in zebrafish（Danio rerio） was expressed in E.coli TB1 and purified according to the construction of prokaryotic expression vector. The specific polyclonal antibodies were raised in Balb/c mouse immunized with the purified recombinant protein. The bacteria conjugation ability and the value of polyclonal antibodies were detected. The results showed that the purified SAA protein in zebrafish was found to combine together with 5 bacteria. The value of obtained antibodies was up to 1∶2 000.

Key words： zebrafish（Danio rerio）; SAA; prokaryotic expression; antibody preparation; bacteria combining

血清样淀粉A（Serum amyloid A， SAA）为高度异质性蛋白[1]，因与一系列疾病相关而成为病理学研究的热点。SAA基因的多态性是淀粉样病变的高危因素，持续高水平SAA是淀粉样病变发生的前提条件[2]。除此之外，SAA与胃癌[3]、直肠癌[4]、胰腺癌[5]、肺癌[6]和绒毛膜癌[7]等恶性肿瘤呈正相关，并将SAA作为癌症临床常规检查的非特异性肿瘤标志物以及手术后康复程度的指标是可行的。人源SAA可以通过NF-κB信号通路诱导细胞间黏附分子1（Intercellular adhesion molecule 1， ICAM-1）的表达而募集白细胞[8]。本研究中在克隆获得全长斑马鱼（Danio rerio）SAA的基础上[9]，构建融合表达载体，在大肠杆菌TB1中表达斑马鱼SAA并进行纯化，将纯化蛋白进行菌结合试验并免疫Balb/c小鼠制备了特异性多克隆抗体，为后续免疫及肿瘤病理学试验打下基础。

1  材料与方法

1.1  试验材料

1.1.1  载体与菌种  原核表达载体pMal-c2x、大肠杆菌（E. coli）表达宿主菌TB1和Amylose Resin多糖树脂购自New England Biolabs公司;pGEM-T vector购自Promega公司;大肠杆菌DH5α、野生型大肠杆菌K12、副溶血弧菌（V.parahaemolyticus）、溶澡酸弧菌（V.alginolyticus）、金黄色葡萄球菌（S.aureus）和表皮葡萄球菌（S.epidermidis）均为铁道警察学院生化快速鉴别实验室常规保种。……