夏方亮

（滨州市食品药品检验检测中心，山东滨州256618）

HPLC法测定补肾活血止痛丸中阿魏酸的含量

夏方亮

（滨州市食品药品检验检测中心，山东滨州256618）

目的建立高效液相色谱法测定补肾活血止痛丸中阿魏酸的含量测定方法。方法用C18柱为固定相，以乙腈－0.085%磷酸溶液（14∶86）为流动相，检测波长为316 nm。结果阿魏酸进样量在0.020 49～0.204 9μg范围内呈良好的线性关系，r＝1（n＝7），其平均回收率（n＝6）为99.83%。方法的检测限LOD为0.307 3 ng，定量限LOQ为1.024 3 ng。结论此方法可靠、准确、专属性强。

补肾活血止痛丸；阿魏酸；高效液相色谱法

补肾活血止痛丸由滨州市中医院配制，具补肝肾、活血、祛瘀和止痛之功效，用于颈、肩、腰、腿痛经久不愈及缓解期。本品处方中有当归、川芎等18味药材，而原质量标准中没有含量测定项，药品质量不能得到有效控制，本文采用高效液相色谱（HPLC）法测定当归和川芎中阿魏酸的含量，具有较高的准确性，可作为该制剂的含量测定方法。

1 仪器与试药

岛津LC－20AT高效液相色谱仪；Prominence SPD－20A／UV－VIS检测器；补肾活血止痛丸（滨州市中医院，批号：20130716、20130813、20130919）；阿魏酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110773－201313，含量以99.6%计，置五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h以上后使用）；甲醇和乙腈（色谱纯，美国Tedia公司），其余试剂为分析纯；纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Thermo BDS Hypersil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；以乙腈－0.085%磷酸溶液（14∶86）为流动相；检测波长为316 nm［1～5］。柱温：35℃，流速：1.0 mL·min－1。理论塔板数按阿魏酸峰计算不低于3 000，阿魏酸峰与相邻峰的分离度应符合要求。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品25.71 mg，置25 mL棕色量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液（浓度为1.024 3 mg·mL－1）。再精密量取上述对照品储备液1 mL，置100 mL棕色量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（浓度为0.010 243 mg·mL－1）。

2.3 供试品溶液的制备 取本品研细，取细粉约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，称定重量，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.4 阴性空白溶液的制备 取缺当归和川芎的处方量，按照制法项制备阴性样品，按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制备阴性空白溶液。

照“2.1”项下色谱条件，分别精密量取对照品溶液、供试品溶液和阴性空白溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图见图1。结果表明：理论板数按阿魏酸峰计算为15 026，阿魏酸峰与相邻峰分离度符合要求。

图1 补肾活血止痛丸阿魏酸含量测定HPLC图谱A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性空白溶液

2.5 线性关系考察 分别精密量取“2.2”项下的对照品溶液（浓度为0.010 243 mg·mL－1）2、4、8、10、14、16、20μL注入液相色谱仪，分别测定峰面积。以阿魏酸对照品的进样量X（μg）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为：Y＝5 108 890X－5 003（r＝1）。结果表明，阿魏酸进样量在0.020 49～0.204 9μg之间与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 精密量取“2.2”项下的阿魏酸对照品溶液（浓度为0.010 243 mg·mL－1）10μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，测其峰面积，RSD为0.44%。结果表明，仪器的精密度良好。

2.7 溶液的稳定性试验 取“2.3”项下制备的供试品溶液，精密量取10μL，注入液相色谱仪，避光条件下每隔4 h进样1次，测定阿魏酸的峰面积，共考察24 h，峰面积RSD为0.92%。结果表明，避光条件下，供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验 取样品（批号：20130716），按照“2.3”项下供试品溶液的制备方法，平行制备6份样品溶液，按上述方法和条件进行测定，计算每份样品阿魏酸的含量（mg·g－1），RSD为1.2%。结果表明，本品含量测定方法的重复性良好。

2.9 加样回收率试验 取已测知含量的补肾活血止痛丸（批号：20130716，阿魏酸含量为0.063 4 mg·g－1）约1.5 g，精密称定，共取6份，置25 mL量瓶中，在每一份样品中精密加入阿魏酸对照品溶液10 mL（浓度为0.010 243 mg·mL－1），加70%甲醇适量，超声处理30 min，放冷，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按上述测定方法进行测定，计算回收率，结果见表1。

表1 阿魏酸加样回收率试验结果

试验结果表明，阿魏酸用该测定方法回收率良好。

2.10 样品测定 按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制备样品溶液，以“2.2”项下溶液作为对照品溶液，测定3批样品中阿魏酸的含量，测定结果见表2。

表2 补肾活血止痛丸阿魏酸含量测定结果

2.11 检测限LOD与定量限LOQ 取“2.2”项下对照品溶液，逐级减少进样量，以信噪比为3∶1时，计算检测限；以信噪比为10∶1时，计算定量限。结果为：检测限LOD＝0.307 3 ng，定量限LOQ＝1.024 3 ng。

3 讨论

3.1 阿魏酸溶液在光照条件下稳定性差，很快分解，反映在液相色谱上有2个峰，试验中应采用棕色量瓶并避光，对照品溶液应临用新配。

3.2 在制备供试品溶液时，本文考察了不同提取方法（超声和回流）［6，7］、不同提取溶剂［甲醇、70%甲醇和乙醇∶水（1∶3）］［8～11］、不同提取时间（15、30和45 min）和不同取样量（2.0、3.0、4.0 g）等条件下，样品中阿魏酸的含量测定结果。

试验表明，阿魏酸采用超声提取30 min与回流提取1 h所测得结果没有显著性差异；采用70%甲醇提取所测样品中阿魏酸的含量较高；超声提取15 min测得阿魏酸含量偏低，30 min和45 min阿魏酸的含量测定结果没有显著差异；3种取样量所测得的含量结果无显著性差异。综合考察试验结果后确定了“2.3”项下供试品溶液的制备方法。

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Determ ination of ferulic acid in Bushen Huoxue Zhitong Pills by HPLC

XIA Fang-liang
（Binzhou Food and Drug Inspection and Testing Center，Binzhou 256618，China）

ObjectiveTo establish a method for the determination of ferulic acid in Bushen Huoxue Zhitong Pills by HPLC.MethodsThe C18column was used，themobile phase was consisted of acetonitrile－0.085%phosphoric acid（14∶86），and the detection wavelength was 316 nm.ResultsThe standard curves of ferulic acid was linear in range of 0.020 49～0.204 9μg，r＝1（n＝7），and the average recovery was 99.83%（n＝6）.The limit of detection was 0.307 3 ng and the limit of quantification was 1.024 3 ng.ConclusionThemethod was reliable，accurate and specific.

Bushen Huoxue Zhitong Pills；Ferulic acid；HPLC

R927.2

A

2095－5375（2015）08－0447－003

夏方亮，男，研究方向：药品质量研究，E－mail：xiafl1980＠126.com