曲巍，于波

(1沈阳市第四人民医院，沈阳110016;2中国医科大学附属第一医院)

心肌纤维化(MF)是多种心脏疾病发展到一定阶段的共同病理改变，是高血压左心室重构的主要表现［1］。肾素—血管紧张素—醛固酮系统(RAS系统)激活、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平增高是导致MF的主要原因［2］。2012年9月～2013年9月，本研究观察新型醛固酮抑制剂依普利酮对自发性高血压(SHR)大鼠MF的影响，并探讨其机制。

1 材料与方法

1.1 动物及分组 雄性SHR大鼠28只，SPF级环境中饲养。随机分为4组，即依普利酮组、替米沙坦组、联合组及对照组，每组7只。分别采用灌胃给予依普利酮100 mg/(kg·d)、替米沙坦10 mg/(kg· d)、替米沙坦10 mg/(kg·d)+依普利酮100 mg/ (kg·d)、生理盐水1 mL/d。用药共8周。

1.2 主要试剂和仪器 依普利酮、替米沙坦等原料药购自武汉富驰生物科技有限公司。兔抗大鼠骨形态发生蛋白7(BMP-7)抗体购自北京博奥森公司，兔抗大鼠转化生长因子信号蛋白2(Smad2)抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。免疫组化SP试剂盒和DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。

1.3 方法

1.3.1 尾动脉收缩压测量 给药前、给药2周及7周应用尾套法测定尾动脉收缩压［3］。连续测3次，取平均值。

1.3.2 左心室质量指数、截面直径测量 给药8周，所有大鼠经10%水合氯醛2 mL/kg腹腔注射麻醉后，仰位固定四肢，沿腹正中切开皮肤，暴露腹主动脉，以分叉处向心端1～3 mm处为穿刺点，采血8～10 mL，处死大鼠。取大体心脏标本，测量左心室质量指数［3］。测量完心脏质量后，迅速将心脏置于4%多聚甲醛中固定心肌组织，固定1周后，于长轴中点垂直横切心脏，直接法测量左心室截面直径，即分别测定最短径(DAMIN)和最长径(DMAN)，取其几何平均值。

1.3.3 心肌组织HE染色 心室标本以4%甲醛缓冲液固定，经脱水、透明、浸蜡后石蜡包埋，制成石蜡标本。石蜡标本切片后进行脱蜡，HE染色，显微镜下观察。

1.3.4 心肌组织BMP-7、Smad2蛋白检测 采用免疫组织化学方法，BMP-7和Smad2蛋白为定位于胞质中的棕黄色颗粒，统计阳性细胞百分比［4］。

1.3.5 统计学方法 采用SPSS18.0统计软件。计量资料以s表示，组间比较采用方差分析;计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组尾动脉收缩压比较 见表1。

表1 各组尾动脉收缩压比较(mmHg，s)

表1 各组尾动脉收缩压比较(mmHg，s)

注:与对照组比较，*P＜0.05。

组别 n 给药前 给药2周 给药7周依普利酮组 7 176.00±9.23 168.00±12.02 157.00±16.21*替米沙坦组 7 172.00±13.25 169.00±11.63 158.00±11.45*联合组 7 174.00±9.76 170.00±13.71 172.00±23.27*对照组7 174.00±12.15 178.00±21.04 191.00±16.57

2.2 各组左心室质量指数、左心室截面直径比较见表2。

表2 各组左心室质量指数、左心室截面直径比较(s)

表2 各组左心室质量指数、左心室截面直径比较(s)

注:与对照组比较，*P＜0.05;与联合组比较，△P＜0.05。

组别 n左心室质量指数(×10－3)左心室截面直径(mm)依普利酮组 7 2.24±0.21＊△10.28±0.54替米沙坦组7 2.79±0.12 11.48±0.35联合组 7 2.37±0.15* 10.69±0.43对照组7 2.81±0.33 12.23±0.61

2.3 各组HE染色结果 HE染色光镜下可见SHR大鼠心肌细胞为长杆状，结构单一，细胞质含量多，细胞核染色深;心肌细胞间有少量纤维组织。依普利酮组及联合组SHR大鼠心肌细胞排列整齐、连接紧密，胞膜完整，无明显炎性细胞浸润;对照组及替米沙坦组SHR大鼠心肌细胞排列紊乱，心肌细胞肥大，细胞间质纤维化，炎性细胞浸润。

2.4 心肌组织BMP-7和Smad2免疫组化结果 见表3。

表3 各组心肌组织BMP-7和Smad2阳性染色细胞比较(%)

3 讨论

研究发现，MF过程有被阻止或逆转的可能［5，6］，心室间充质细胞作为心室瓣膜及室间隔最初存在的形式，都来自于上皮细胞衍生［7］。BMP-7是TGF-β1家族成员之一，能够对抗TGF-β1作用。TGF-β1信号会被跨膜丝氨酸，苏氨酸激酶Ⅰ型受体、Ⅱ型受体和细胞内介质Smad转导［5］。Smad2、Smad3蛋白通过丝氨酸残基磷酸化，与Smad4蛋白结合转运到细胞核，在核内控制TGF-β1反应基因转录。TGF-β1与BMP具有非常相似的信号转导机制，同样可以经过激活细胞膜表面相应Ⅰ型、Ⅱ型受体，形成复合体，从而激活细胞内Smad蛋白，转入核内，启动相关的基因表达［6］。因此，BMP-7可能逆转MF［7］，同时也可抑制心肌肥厚过程［8］。BMP激活Ⅱ型受体后，Ⅱ型受体可转磷酸化Ⅰ型受体，进而激活下游Smads蛋白［9］。BMP家族通过Smad1对心肌细胞发挥保护作用，并且在心肌细胞分化、发育过程中发挥重要作用。BMP2可通过Smad1进一步激活3-磷酸激酶，从而增强心肌收缩力［10］。BMP/ Smads参与心肌细胞的多种信号转导，不同亚型在MF和凋亡的信号转导过程中发挥不同的作用［11，12］。

本研究发现，依普利酮组、替米沙坦及联合组SHR大鼠心室的相对质量明显低于对照组，提示依普利酮、替米沙坦及二者联合应用均可减缓SHR大鼠心室重构，抑制MF。本研究中依普利酮组心肌组织Smad2阳性表达低于对照组，依普利酮组及联合组BMP-7阳性表达高于对照组。由此推测，依普利酮抑制SHR大鼠MF，促进BMP-7表达、抑制Smad2表达可能是其作用机制之一。

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